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《mg132對(duì)肝癌細(xì)胞bel7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、MG132對(duì)肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究作者：曲春媚李伯勤劉倩毛海婷張玲【摘要】目的：探討泛素蛋白酶體通路阻斷劑MG132對(duì)肝癌細(xì)胞BEL7402細(xì)胞凋亡和超微結(jié)構(gòu)的影響。方法：以5和10μmol/LMG132分別處理人肝癌BEL7402細(xì)胞24和48h，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡；DNA片段分析進(jìn)一步證實(shí)凋亡存在，Western印跡檢測(cè)Bax蛋白表達(dá)，比色法測(cè)Caspase3活性變化，用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果：隨著MG132濃度的增加和處理時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡率增加；細(xì)胞DNA抽提電泳發(fā)現(xiàn)特征性凋亡梯狀條帶；Bax蛋白表達(dá)增加；Caspase3
2、活化；電鏡觀察到典型凋亡細(xì)胞，線粒體等細(xì)胞器的形態(tài)變化與MG132濃度和作用時(shí)間有關(guān)。結(jié)論：蛋白酶體抑制劑MG132可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡；線粒體損傷、Bax蛋白上調(diào)、Caspase3激活可能在MG132誘導(dǎo)BEL7402細(xì)胞凋亡起重要作用?！娟P(guān)鍵詞】癌，肝細(xì)胞・超微結(jié)構(gòu)・MG132・凋亡EffectofMG132onultramicrostructureandapoptosisofhumanhepatocelluarcancercelllineBEL740211【ABSTRACT】Objective:Toexplorethe
3、mechanismoftheapoptosisofhumanhepatocellularcancercellsBEL7402inducedbyMG132.Method:BEL7402cellsweretreatedwithMG132,apoptosisratewasdetectedwithflowcytometry(FCM),DNAfragmentanalysiswasusedforconfirmingthepresenceofapoptosis,expressionofBaxwasdectectedbyWesternblotting,theactivityofcaspase3
4、wasdeterminedbycolorimetricassay,themorphologicchangewasobservedbytransmissionelectronmicroscope.Result:CellapoptosispercentageofBEL7402cellincreasedwithraisedconcentrationsandprolongedtreatmentofMG132,agaroseelectrophoresisshowedmarkedladder,expressionofBaxwasupregulated,caspase3wasactivite
5、d,thetypicstructureofapoptosiscellswasfound,differentfeaturesofultrastructurechangesofmitochondriaandotherorganellaewereobservedincellsexposedtodifferentconcentrationandtreatingtimeofMG132.Conclusion:ProteasomeinhibitorMG132caninduceapoptosisofBEL7402cells,Baxproteinandcaspase3andmitochondri
6、ainjurywereresponsibleforapoptosisofBEL7402cellinducedbyMG132.【KEY11WORDS】Carcinoma,hepatocellular・Ultrastructure・MG132・Apoptosis泛素蛋白酶體途徑是細(xì)胞內(nèi)蛋白降解的一個(gè)主要途徑，這些蛋白包括轉(zhuǎn)錄因子，腫瘤抑制蛋白，原癌基因等。抑制泛素蛋白酶體途徑，可使細(xì)胞生長(zhǎng)抑制甚至凋亡［1］。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白酶體抑制劑可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡［2～4］，本研究探討蛋白酶體抑制劑MG132（ZLeuLeuLeuCHO）對(duì)肝癌細(xì)胞B
7、EL7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)的影響。1材料與方法1.1材料1.1.1試劑MG132購(gòu)自Calbiochem公司，RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)自GIBCO公司，Bax單克隆抗體購(gòu)自SantaCruz公司，BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)公司，Caspase3／CPP32Colorimetric試劑盒購(gòu)自Biovision公司。1.1.2細(xì)胞人肝癌細(xì)胞BEL7402由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所劉耕陶教授惠贈(zèng)。培養(yǎng)液為RPMI1640(GIBCO)、10％小牛血清，消化液為0.25％胰蛋白酶。將
