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《mg132對肝癌細(xì)胞bel7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、MG132對肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究曲春媚李伯勤劉倩毛海婷張玲【摘要】目的：探討泛素蛋白酶體通路阻斷劑MG132對肝癌細(xì)胞BEL7402細(xì)胞凋亡和超微結(jié)構(gòu)的影響。方法：以5和10μmol/LMG132分別處理人肝癌BEL7402細(xì)胞24和48h，用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡；DNA片段分析進(jìn)一步證實(shí)凋亡存在，G132濃度的增加和處理時間延長，細(xì)胞凋亡率增加；細(xì)胞DNA抽提電泳發(fā)現(xiàn)特征性凋亡梯狀條帶；Bax蛋白表達(dá)增加；Caspase3活化；電鏡觀察到典型凋亡細(xì)胞，線粒體等細(xì)胞器的形態(tài)變化與MG132濃度和作用時間有關(guān)。
2、結(jié)論：蛋白酶體抑制劑MG132可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡；線粒體損傷、Bax蛋白上調(diào)、Caspase3激活可能在MG132誘導(dǎo)BEL7402細(xì)胞凋亡起重要作用?！娟P(guān)鍵詞】癌，肝細(xì)胞・超微結(jié)構(gòu)・MG132・凋亡EffectofMG132onultramicrostructureandapoptosisofhumanhepatocelluarcancercelllineBEL7402【ABSTRACT】Objective:Toexplorethemechanismoftheapoptosisofh
3、umanhepatocellularcancercellsBEL7402inducedbyMG132.Method:BEL7402cellsetry(FCM),DNAfragmentanalysisingthepresenceofapoptosis,expressionofBaxinedbycolorimetricassay,themorphologicchangeissionelectronmicroscope.Result:CellapoptosispercentageofBEL7402cellincreasedentofMG132,a
4、garoseelectrophoresisshoarkedladder,expressionofBaxitochondriaandotherorganellaeeofMG132.Conclusion:ProteasomeinhibitorMG132caninduceapoptosisofBEL7402cells,Baxproteinandcaspase3andmitochondriainjurya,hepatocellular・Ultrastructure・MG132・Apoptosis泛素蛋白酶體
5、途徑是細(xì)胞內(nèi)蛋白降解的一個主要途徑，這些蛋白包括轉(zhuǎn)錄因子，腫瘤抑制蛋白，原癌基因等。抑制泛素蛋白酶體途徑，可使細(xì)胞生長抑制甚至凋亡［1］。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白酶體抑制劑可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡［2～4］，本研究探討蛋白酶體抑制劑MG132（ZLeuLeuLeuCHO）對肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡及超微結(jié)構(gòu)的影響。1材料與方法1.1材料1.1.1試劑MG132購自Calbiochem公司，RPMI1640培養(yǎng)基購自GIBCO公司，Bax單克隆抗體購自SantaCruz公司，BCA蛋白濃度測定試劑盒購自碧云天生物技術(shù)公司，Caspase3／CPP32C
6、olorimetric試劑盒購自Biovision公司。1.1.2細(xì)胞人肝癌細(xì)胞BEL7402由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所劉耕陶教授惠贈。培養(yǎng)液為RPMI1640(GIBCO)、10％小牛血清，消化液為0.25％胰蛋白酶。將細(xì)胞置于37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2方法1.2.1 AnnexinV/PI雙染色流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率實(shí)驗(yàn)組：分別給予終濃度為5.0、10.0μmol/LMG132（實(shí)驗(yàn)組1、2）的培養(yǎng)液。對照組：給予不含MG132的培養(yǎng)液。均繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h后，收集細(xì)胞，制備懸液，作PBS洗2次，采用AnnexinV
7、和PI熒光染色、FACS定量分析細(xì)胞凋亡狀況。根據(jù)結(jié)果，選出用于以下實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度。1.2.2DNA片段分析收集經(jīng)5.0μmol/LMG132處理48h的細(xì)胞及對照組細(xì)胞，參照文獻(xiàn)方法［5］提取細(xì)胞DNA，瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，凝膠成像系統(tǒng)成像。1.2.3G132兩組凋亡率高于對照組，凋亡率隨藥物濃度增加、隨作用時間延長而升高。2.2細(xì)胞DNA片段檢測結(jié)果見圖2。BEL7402細(xì)胞經(jīng)MG132處理48h后出現(xiàn)凋亡特征性DNA梯形條帶，對照組則無。2.3MG132對Bax蛋白表達(dá)的影響見圖3。結(jié)果顯示BEL7402細(xì)胞經(jīng)MG132處理后Bax蛋
8、白表達(dá)顯著上調(diào)。2.4MG132對Caspase3活性的影響實(shí)驗(yàn)組1作用24h測A405為0.300，對照組為0.068，表明BEL7402細(xì)胞經(jīng)MG132處理后，Caspase
