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《原子力顯微鏡對星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤的鑒別診斷》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、原子力顯微鏡對星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤的鑒別診斷作者:張佳怡紀小龍王美娥【摘要】目的通過原子力顯微鏡(AFM)觀察星形細胞瘤(II/WHO)細胞、間變性星形細胞瘤(III/WHO)細胞的細胞膜表面超微結(jié)構(gòu)的變化和差異,為臨床的星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤鑒別診斷提供幫助和向?qū)А7椒ㄟx取星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤各30例,每例隨機選取10個細胞作為研究對象,應(yīng)用AFM并對每例的10個細胞進行掃描,對每個細胞膜表面1μm區(qū)域的平均粗糙度、峰值、表面積差值進行測量,對比觀察兩組細胞膜表面的納米結(jié)構(gòu)變化、找出腫瘤細
2、胞特異性的形態(tài)學(xué)特征。結(jié)果通過觀察發(fā)現(xiàn)星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤的細胞膜表面存在著顯著的差異,星形細胞瘤細胞膜表面的平均粗糙度、峰值、表面積差值均明顯低于間變性星形細胞瘤(P<0.05)。結(jié)論本實驗應(yīng)用AFM對星形細胞瘤細胞、間變性星形細胞瘤細胞進行觀察,并依據(jù)細胞膜表面數(shù)據(jù)對星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤進行鑒別診斷?!娟P(guān)鍵詞】原子力顯微鏡星形細胞瘤間變性星形細胞瘤膜蛋白原子力顯微鏡(atomicforce10microscope,AFM)[1]是具有原子級分辨率的新一代顯微鏡,可以在常規(guī)生理環(huán)境中清晰呈
3、現(xiàn)出細胞膜表面的超微結(jié)構(gòu)并進行數(shù)據(jù)分析。AFM的出現(xiàn)對膜蛋白結(jié)構(gòu)的認識提供了更廣的空間,蛋白質(zhì)分子在脂質(zhì)上有規(guī)律地排列或者能在膜上形成二維晶體,均適合于應(yīng)用AFM研究[2,3],使人們對生命的認識開始深入到了納米級水平上的超微觀領(lǐng)域?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明[4-6]:腫瘤細胞膜表面受體蛋白與細胞外部生長因子(或其它刺激因素)結(jié)合后的跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在腫瘤的發(fā)生中起著重要作用。細胞外部信號無論是作用于細胞核內(nèi)還是核外,它們的傳遞都必須經(jīng)由細胞膜,并與細胞膜表面的特異性受體(蛋白)結(jié)合,然后傳遞至細胞內(nèi)而發(fā)揮作用。一旦細胞表面
4、受體蛋白的結(jié)構(gòu)與功能出現(xiàn)異常,則其持續(xù)的激活狀態(tài)將導(dǎo)致細胞增殖失控,從而促進腫瘤的發(fā)生。腫瘤細胞的生長過程必然伴有細胞膜表面蛋白(數(shù)量和形態(tài))的改變。采用AFM對星形細胞瘤細胞和間變性星形細胞瘤細胞進行觀察,研究二者細胞膜表面超微結(jié)構(gòu)的差異,為其臨床的鑒別診斷提供依據(jù)。1材料與方法1.1材料和設(shè)備標本全部經(jīng)HE染色確定為星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤的新鮮組織細胞,來源于武警總醫(yī)院。各30例;2%甲醛溶液、蘇木素—10伊紅染液、巴氏染液、酒精、二甲苯。主要設(shè)備:原子力顯微鏡(型號為NanoscopeⅢa(Digit
5、alInstrumentsInc.,SantaBarbara,CA),采用NSC—11型針尖;OlympusBX50光學(xué)顯微鏡;顯微圖像分析系統(tǒng);超凈工作臺;離心機、漩渦混合器。1.2方法1.2.1分別用刮板在收集到的星形細胞瘤、間變性星形細胞瘤組織上進行取樣,并將采集了瘤細胞的刮板放入裝有2%甲醛溶液的試管中,在試管上做好標記,搖蕩刮板使細胞標本洗脫在溶液中,去除刮板后固定20min,用200目鋼網(wǎng)過濾,去除組織殘塊和細胞團,放入離心機,1500r/min離心15min,緩緩傾去上清液,再用2%甲醛溶液洗滌、離
6、心、棄上清液反復(fù)3次,加少許2%甲醛溶液將沉淀的細胞用漩渦混勻器混勻,將細胞懸液涂于潔凈的載玻片上,置于潔凈空間晾干備用。1.2.2AFM觀測將樣本晾干后置于AFM載物臺上,利用Nikon倒置顯微鏡觀察細胞的分散情況,選擇細胞分散較好的區(qū)域進行掃描。最大掃描范圍100μm,用200μm長的Si3N4微懸臂,采用輕敲模式(Tappingmode),圖像采集為恒力模式(Height10mode)。調(diào)整激光與針尖重合,并將探測器的激光光斑置于中心圓點。在操作軟件下進行自動調(diào)頻,然后下降探針,直至針尖接觸到樣本,開始掃描
7、。此時計算機顯示該細胞相應(yīng)的圖像,此圖像可以進行測量和保存。每例樣本掃描10個細胞,掃描范圍為500nm~100μm,掃描頻率為0.5~2Hz。選細胞膜表面顏色最亮、突起最大最密集的區(qū)域測量,所選細胞測量范圍均為1μm,每一組各測量300個區(qū)域。并利用AFM圖象分析軟件對每個1μm區(qū)域的平均粗糙度、峰值、表面積差值進行分析。并獲取3種參數(shù)的具體測量值,采用SPSS13.0軟件對這而種細胞的3種參數(shù)值進行方差分析,比較細胞間是否有差別。2結(jié)果2.1細胞形態(tài)觀察結(jié)果星形細胞瘤細胞表面呈現(xiàn)層狀排列的皺褶結(jié)構(gòu),胞體間見大
8、量粗細不一的胞突,有時難以分辨它們的所屬細胞。間變性星形細胞瘤細胞密度大,胞膜表達不光滑皺褶結(jié)構(gòu)更為明顯,瘤細胞胞突少,長短不一,但主要為較短小突起。2.2細胞膜AFM下納米水平表現(xiàn)利用AFM的圖像分析軟件系統(tǒng)對星形細胞瘤細胞、間變性星形細胞瘤細胞細胞膜表面重要指標即平均粗糙度(meanroughness)、峰值(peakcount)和表面積差值(surfacearea1