大腸腺瘤及癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)及臨床意義

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1、大腸腺瘤及癌組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)及臨床意義為探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)與大腸癌組織發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，作者用免疫組化SABC法檢測13例正常大腸黏膜、26例大腸腺瘤和50例大腸癌組織中HIF-1α的表達(dá)，并探討其與大腸癌患者年齡、腫瘤大小、分化程度、浸潤轉(zhuǎn)移等的聯(lián)系。　　1資料與方法　　1.1一般資料　　取資料完整的大腸腺瘤26例及腺癌50例石蠟包埋標(biāo)本，均經(jīng)病理診斷。大腸腺癌50例中，男28例，女22例，年齡43～78(57.9±9.2)歲，其中高分化17例、中分化24例、低分化9例，DukesA11例、B11例、C18例、D10例。大腸腺瘤26例中，管

2、狀腺瘤10例、絨毛狀腺瘤9例、管狀-絨毛狀腺瘤7例。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療和免疫治療。另取13例正常大腸組織石蠟包埋標(biāo)本作對照。　　1.2方法　　采用免疫組化SABC法檢測HIF-1α表達(dá)，染色步驟按試劑盒說明書進(jìn)行,染色前用微波進(jìn)行抗原熱修復(fù)10min,用PBS5代替一抗作空白對照,用正常羊血清代替一抗作陰性對照,已知陽性切片作陽性對照。兔抗人HIF-1α多克隆抗體(工作濃度1∶100)和SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物公司?！　?.3結(jié)果判定　　HIF-1α蛋白以細(xì)胞胞質(zhì)或胞核內(nèi)有棕黃色細(xì)顆粒為陽性表達(dá)。按照zhong等［５］方法，于高倍鏡下（X400）對

3、每張切片隨機選擇5個視野，計數(shù)200個細(xì)胞/視野，共計1000個，陽性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性（-），陽性細(xì)胞數(shù)1%～10%為弱陽性（+），10%～50%為中度陽性（），＞50%為強陽性（）?！　?.4統(tǒng)計學(xué)處理　　應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件，采用χ2檢驗或Fishers精確概率法,參數(shù)間的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析?！　?結(jié)果　　2.1HIF-1α在正常大腸組織、大腸腺瘤及癌組織中的表達(dá)　　HIF-1α蛋白主要表達(dá)于胞漿，也有部分胞核表達(dá)(圖1、2)。正常大腸組織中HIF-1α5均為陰性表達(dá)，腺瘤陽性表達(dá)率為30.8%（8/26），癌組織陽性表達(dá)率為64.0%（

4、32/50）。大腸癌組織中在腫瘤壞死明顯的區(qū)域和腫瘤浸潤的邊緣陽性表達(dá)強。腺瘤HIF-1α陽性表達(dá)率高于正常組織（χ2=7.483，Ｐ＜0.05），腺癌HIF-1α陽性表達(dá)率顯著高于腺瘤（χ2=8.546，Ｐ＜0.01）?！　?.2HIF-1α表達(dá)與大腸癌臨床病理關(guān)系　　見表1。表1HIF-1α表達(dá)與大腸癌臨床病理特征聯(lián)系（略）注：與＜60歲年齡相比，P＜0.05；與＜3cm腫瘤比，△P＜0.01；與高中分化程度比，☆P＜0.01　　腫瘤浸潤至漿膜者HIF-1α陽性表達(dá)率顯著高于未浸潤至漿膜者（74.36%與27.27%，χ2=6.339，Ｐ<0.05）。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

5、者HIF-1α陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（82.14%與40.91%，χ2=9.091，Ｐ<0.01）。HIF-1α陽性表達(dá)率隨Dukes分期從A到D期逐漸增高，HIF-1α表達(dá)與Dukes分期相關(guān)（χ2=10.72，Ｐ＜0.05）。HIF-1α表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、分化程度無顯著相關(guān)性(P>0.05)。　　3討論5實體腫瘤廣泛存在著缺氧微環(huán)境，這主要是由于腫瘤血管結(jié)構(gòu)和功能異常、微循環(huán)障礙所致的氧供減少及腫瘤細(xì)胞快速增殖氧耗增加所致。越來越多的資料顯示，缺氧是腫瘤發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化甚至轉(zhuǎn)移的始動因素。HIF-1α是介導(dǎo)細(xì)胞對缺氧微環(huán)境進(jìn)行適應(yīng)性反應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)

6、錄調(diào)控因子［１］。HIF-1α激活后可以調(diào)節(jié)多種下游基因表達(dá)，對維持腫瘤細(xì)胞能量代謝，新生血管形成、促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移起重要作用［２～４］?！　〈竽c癌是我國位居第四位的常見惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率有逐年增高的趨勢，但其發(fā)生機制目前尚未完全明確。目前研究表明90%大腸癌起源于腺瘤，然而腺瘤如何癌變具體機制尚不清楚。本研究觀察了正常大腸組織腺瘤及不同分期大腸癌組織HIF-1α表達(dá)，結(jié)果顯示，HIF-1α在正常大腸組織中無表達(dá)，在腺瘤中陽性表達(dá)率為30.8%，在癌組織中表達(dá)率為64.0%，三者之間表達(dá)率差異有顯著性。HIF-1α表達(dá)水平在正常組織-腺瘤-腺癌中不斷增高，這表明細(xì)胞

7、缺氧出現(xiàn)在大腸癌變之前并持續(xù)到腫瘤發(fā)展的全過程，HIF-1α過表達(dá)可能是癌變過程中的早期事件。部分腺瘤高表達(dá)HIF-1α，而HIF-1α通過激活多種下游基因表達(dá)，在促進(jìn)腺瘤癌變中可能發(fā)揮著重要作用。由此可以設(shè)想，在腺瘤癌變早期階段使用HIF-1α特異性拮抗可能會阻止大腸腺瘤的惡變進(jìn)程。本資料還觀察到，腫瘤浸潤漿膜，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HIF-1α陽性表達(dá)率高于未浸潤漿膜及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且隨著Dukes分期進(jìn)展，HIF-1α表達(dá)率逐漸增高，表明HIF-1α在大腸癌的浸潤、轉(zhuǎn)移中起重要作用，HIF-1α高表達(dá)的