急性子提取物抗氧化活性的體外研究

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1、急性子提取物抗氧化活性的體外研究【摘要】　　目的研究急性子提取物的體外抗氧化活性。方法提取急性子水溶性物質(zhì)和脂溶性物質(zhì)，并將脂溶性物質(zhì)用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇遞次萃取，然后將各提取物分別進行抗卵黃脂質(zhì)過氧化及消除氧自由基活性的考察。結(jié)果急性子醋酸乙酯提取物對卵黃脂質(zhì)過氧化抑制率能達到90%以上，對氧自由基抑制率能達到70%以上，明顯高于Vc。結(jié)論急性子醋酸乙酯提取物具有很好的抗氧化作用?！娟P(guān)鍵詞】急性子抗氧化體外　　自由基是引起癌癥、衰老、心血管病等退變性疾病的根源,生物體內(nèi)常見的自由基有超氧陰離子自由基、羥基自由基、烷氧基自由基等，其中超氧陰離子自由基形成最早，清除了超氧陰離子自

2、由基，即可從根本上預(yù)防體內(nèi)形成過多的羥基自由基和其他活性氧自由基，達到防衰老、抗癌、抗心血管病的目的［1］。急性子為鳳仙花科植物鳳仙花Impatiensbalsamina的干燥成熟種子，夏秋種子即將成熟時采收。急性子具有軟堅消積、降氣行癖、透骨通筋活血的作用。急性子還有一定的抗癌作用，藥敏試驗證實對胃淋巴肉瘤細胞敏感［2］。本文首次研究了急性子抗卵黃脂質(zhì)過氧化作用、消除氧自由基的能力并測定了其還原力，體外實驗證明急性子具有抗氧化作用，定性鑒別表明其含有黃酮類化合物多碳化合物。本實驗為急性子資源的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，并為急性子天然抗氧化劑的開發(fā)提供了理論依據(jù)。8　　1材料與儀器　　1.

3、1材料來源　　急性子購于同仁堂沈陽中街店，經(jīng)鑒定為Semenimpatientis?！　?.2試劑與儀器　　儀器主要有數(shù)字恒溫水浴鍋，低速離心機，循環(huán)水式多用真空泵，電子天平，電熱干燥培養(yǎng)箱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。所用試劑均為國產(chǎn)分析純?！　?方法　　2.1急性子中物質(zhì)的提取　　2.1.1急性子中脂溶性物質(zhì)的提取　　將急性子用粉碎機粉碎，之后用95%乙醇回流提取3次，28h/次，然后進行抽濾，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑，至無醇味。加適量水混勻，分別用石油醚、醋酸乙醋、正丁醇萃取。揮散溶劑，即得到提取物質(zhì)?！　?.1.2急性子中水溶性物質(zhì)的提取　　將急性子用粉碎機粉碎，用石油醚脫脂。脫

4、脂處理后的粉末放入圓底燒瓶中，加入80%乙醇回流去掉小分子物質(zhì)，將乙醇揮散。樣品按照1∶100的比例加蒸餾水，在80℃水浴煮3次，2h/次，抽濾，棄殘渣，合并濾液，70℃濃縮為原體積的1/3,加入3倍體積95%的乙醇,抽濾，沉淀用乙醇、丙酮抽洗，冷凍干燥得粗多糖?！　?.2急性子抗氧化活性的體外研究　　2.2.1急性子抗卵黃脂質(zhì)過氧化活性的測定［3］　　采用依賴雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過氧化模型,操作步驟:新鮮卵黃用等體積的0.1mol/LpH7.4的PBS按1∶1配成懸液,再稀釋成1∶25(卵黃∶總體積),磁力攪拌30min。在一組試管中加入上述卵黃懸液0.2ml;分別加入樣品0.1ml

5、(對照管加入PBS)，再加入25mmol/L的硫酸亞鐵0.2ml;用0.1mol/LPBS補至2ml,置于37水浴振蕩50min,取出后加入20%三氯乙酸0.5ml,靜置10min后.3000r/min離心15min,取上清液2.0ml加入0.8%硫代巴比妥酸1.0ml8塞緊管口100℃水浴15min,空白管以PBS取代上清液,其余相同,532nm測光吸收,計算抑制率?！　∫种坡剩?）=對照吸光度-樣品吸光度對照吸光度×100%　　2.2.2急性子清除氧自由基活性測定　　取8個微燒杯，編好號后，按NBT光還原法加入各試劑及樣品。試劑加入后充分混勻，取1號燒杯放入暗處作為空白（調(diào)零時用

6、），其它7個微燒杯放入4500Lux日光燈照射下啟動反應(yīng)，15min后遮光終止反應(yīng)。在560nm波長下測定光密度，以2，3號杯的OD值計算出不同試劑量在反應(yīng)系統(tǒng)中抑制NBT關(guān)還原的相關(guān)百分率。然后以所加試劑量為橫坐標，以抑制百分率為縱坐標作圖，畫出兩者的相關(guān)曲線?！　?.2.3還原力的測定　　分別取2.5ml不同濃度的醋酸乙酯提取物于試管中，依次加入2.5ml0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.6）和2.5mlK4［Fe（CN）6］于50℃水浴保溫20min后，快速冷卻，再加入2.5ml10%TCA，以4000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液2.5ml依次加入2.

7、5ml重蒸水，0.5ml0.1%FeCl3，充分混勻，靜止10min，在700nm處測定吸光度值，以重蒸水做陰性對照，抗壞血酸為陽性對照。8　　2.3定性鑒別將醋酸乙酯提取物分別進行下列顏色反應(yīng)：　　鹽酸-鋅粉反應(yīng)：將樣品溶于甲醇或乙醇，滴加幾滴濃鹽酸，再加入少許的鋅粉振蕩，必要時微熱，觀察顏色?！　“毖喝z品的乙醇溶液點于濾紙片上，將濾紙在氨水上方熏30s，立即在紫外燈下觀察。　　三氯化鋁反應(yīng)：取檢品的乙醇溶液點于濾紙片上，1%三氯化鋁乙醇溶液通過紙斑