兩種洗板方法在ELISA中的應(yīng)用分析.doc

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1、兩種洗板方法在ELISA中的應(yīng)用分析【摘要】目的：探討酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)中的洗板技術(shù)，試圖找到一種簡(jiǎn)單、高效、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、可靠的ELISA洗板方法。方法：對(duì)753例臨床體檢乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的標(biāo)本，分別用手工法和全自動(dòng)洗板機(jī)法兩種方法進(jìn)行洗板，進(jìn)行組間對(duì)比分析；將弱陽(yáng)性標(biāo)本選出，重新檢測(cè)2次，分別用兩種方法洗板，看看弱陽(yáng)性是否因洗板方法不同引起。結(jié)果：753例用ELISA方法檢測(cè)HBsAg試驗(yàn)中，用手工法洗板和用洗板機(jī)洗板，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，P>0.05，兩種洗板方法差異無(wú)顯著性；18例弱陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)中，洗板方法的不同，不是造成假陽(yáng)性

2、的根本原因。結(jié)論：兩種洗板方法無(wú)差別，在ELISA實(shí)驗(yàn)中，手工法可以代替洗板機(jī)法洗板。手工法簡(jiǎn)單、高效、實(shí)用，應(yīng)可規(guī)范推廣。【關(guān)鍵詞】ELISA洗板；洗板方法；弱陽(yáng)性　　ComparisonbetweenTwoCleaningmethodsonELISA　　Abstract:ObjectiveToinvestigatethecleaningtechnologyoftheELISA.Trytofindasimplehigheffectiveandutilitycleaningtroughsmethod.MethodsTousehandlemetho

3、dandautowashingmachinemethodtocleanthetroughsofHBsAgwithELISAin753healthcheckingpeoples,Comparedbetweenthetwocleaningmethods;Meanwhile,toselectweakpositivesamplesoutandtestrepeatedlytwotimes,tocleanthetroughswiththetwomethods,whetherdoesitexistdifferencebetweenthetwomethods.w

4、hetherdoesitcausethefakepositivebythecleaningmethods.ResultsThereisnotsignificantdifference(P>0.05)tocleantroughswiththetwocleaningmethodsintestingHBsAgwithELISAin753cases,Thecleaningmethodisn'ttherealcauseofthefakepositiveintesting18serumsamplesofweakpositive.ConclusionWas

5、hingwiththetwocleaningmethods,theresulthasnotdifference.thewashmachinemethodcanbesubstitutedbythehandlemethod.thehandlemethodissimple,higheffectiveandpractice.　　Keywords:ELISACleaningtroughs;Cleaningmethods;Weakpositive4　　在酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中，洗板是非常重要的過(guò)程。酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)洗滌過(guò)程雖不是一個(gè)反應(yīng)過(guò)程，但卻也決定

6、著實(shí)驗(yàn)的成?。?］。ELISA就是通過(guò)洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，通過(guò)洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍的，在ELISA測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，洗滌時(shí)又應(yīng)將這些非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌掉。在ELISA操作中，洗滌是非常關(guān)鍵的，應(yīng)引起操作者的高度重視。我們對(duì)753例用ELISA方法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的洗板過(guò)程進(jìn)行了檢測(cè)，采用我們自創(chuàng)的人工洗板法和全自動(dòng)洗板機(jī)洗板對(duì)比試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下?！　?材料和方法

7、　　1.1材料　　1.1.1標(biāo)本來(lái)源及類(lèi)型753例標(biāo)本來(lái)源于廣東省深圳市龍崗區(qū)南嶺人民醫(yī)院2005年12月8日至2006年1月4日的工廠(chǎng)體檢血清標(biāo)本，其中男性121例，女性653例，年齡17歲～43歲,平均年齡為30歲?！　?.1.2乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)?！　?.1.3一個(gè)大的臉盆和一些棉質(zhì)毛巾?！　?.1.4消毒劑健之素(含有效氯500mg/片)?！　?.1.5特建一個(gè)有開(kāi)關(guān)口的洗滌池?！　?.1.6全自動(dòng)洗板機(jī)美國(guó)MultiwashⅡ?！　?.2方法　　1.2.1手工法按試劑說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作，稀釋液

8、用蒸餾水按1∶20稀釋濃縮洗液，適量置于臉盆之中。從37℃水浴溫箱中拿出溫浴到時(shí)