elisa在食品檢驗中的應用

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1、酶聯(lián)免疫分析技術在食品檢驗中的應用酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)是把抗原抗體反應的特異性和酶的高效催化作用有機結合起來的一種非放射性標記免疫檢測技術。ELISA技術流程ELISA在食品檢驗中的應用食品中農(nóng)藥殘留的檢測食品中藥物殘留的檢測食品中毒素的檢測食品中微生物的檢測食品中轉基因產(chǎn)品的檢測食品中其他成分的檢測1.1食品中農(nóng)藥殘留的檢測自1983年以來，ELISA成為許多國際權威分析機構(如AOAC)分析殘留農(nóng)藥的首選方法。有些發(fā)達國家，如美國、德國已開發(fā)出商品檢測試劑盒應用于食品、蔬菜和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留的檢測分析。迄今為止，應用ELISA檢測食品中的殘留農(nóng)藥主要是除草劑、殺菌劑和

2、殺蟲劑。Clegg等建立了分析草甘膦的ELISA；余萬俊等用抗殺蟲脒單克隆抗體為試劑，建立了間接競爭法、直接競爭法和標記抗原競爭法等三種測出大米中殺蟲脒的ELISA；浙江大學的朱國念等研究出ELISA試劑盒來檢測克百威。1.2食品中藥物殘留的檢測為了促進動物生長，預防動物的各種傳染病、寄生蟲病的發(fā)生，越來越多的激素類獸藥、抗菌藥、抗寄生蟲藥，常常被用作飼料添加劑，小劑量長期喂養(yǎng)禽畜水產(chǎn)等動物，導致肉類食品中的獸藥殘留超標現(xiàn)象日益嚴重?，F(xiàn)在國際上比較重視的殘留藥物有抗生素、磺胺類、呋喃類、喹喏酮類、激素類和轉基因類藥物。人們都在尋求適用的檢測方法．8O年代后期，ELISA在殘留分析中

3、發(fā)展迅速，吳定等制備了兔抗氨芐西林鈉血清，建立了快速測定乳中氨芐西林鈉含量的ELISA方法。2003年，LoomansE等用新霉胺作為免疫原建立ELISA方法同時檢測牛奶中的慶大霉素、卡那霉素和新霉素。1.3食品中毒素的檢測食品中的毒素有三種：一、細菌產(chǎn)生的毒素；二、真菌所產(chǎn)生的毒素三、一些動植物中含有天然毒性蛋白。采用辣根過氧化氫酶(HRP)標準高親和力的黃曲霉B1抗體，可以建立直接競爭抑制ELISA快速篩選法。在獲得抗河豚毒素(TXX)的單克隆抗體的基礎上建立了檢測TXX的間接ELISA方法，其最低檢出濃度為1.0×103mg/I，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。與傳統(tǒng)方法相比，間接ElIS

4、A方法的樣品提取方法比較簡單。1.4食品中微生物的檢測常規(guī)的微生物學檢驗：以分離培養(yǎng)、生化試驗及血清學試驗來進行判斷，不僅需要大量的手工勞動，而且檢驗周期長(6—7d)。ELISA檢測：不受各種樣品成分的影響，而且在2—3d內(nèi)即可完成樣品篩選。糞樣、魚粉、奶樣，其敏感性和特異性分別高達100和97.6?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些細菌，如副溶血性弧菌、幽門螺桿菌、大腸桿菌等在低溫貧營養(yǎng)的條件下，可以進入“活的非可培養(yǎng)態(tài)”，在適當狀態(tài)下還可以復蘇，仍具有致病力。常規(guī)的培養(yǎng)法無法檢測到處于這種狀態(tài)的細菌，造成漏檢。而ELISA在這方面具有一定的潛力。1.5食品中轉基因產(chǎn)品的檢測Rogan等人用ELIS

5、A法檢測出傳統(tǒng)大豆加工產(chǎn)品中混有的CP4EPSPS蛋白質。這種蛋白質檢測方法具有商業(yè)可利用性，并具有高度選擇性和靈敏性。FDA已研究了用雙夾心ELISA法來檢測食品是否含轉基因玉米成分。EnvimlogixELISA測試盒可用于測定玉米中的cry9e蛋白，共測試了9種含玉米的食品，結果的重現(xiàn)性相當好。1.6食品中其它成分的檢測免疫球蛋白(Immunoglobulin，簡稱Ig)指具有抗體活性，能與相應抗原發(fā)生特異結合的球蛋白，是構成體液免疫的重要的物質。牛乳中特別是初乳中免疫球蛋白的含量相當高，最近開發(fā)的免疫奶，就是通過對乳牛進行免疫注射從而提高牛奶中的免疫球蛋白的含量；再有市場中

6、強化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也是一種蛋白質，具有蛋白質的共性，但其在上述制品中含量又相對的少，常規(guī)的蛋白測定法無法測出免疫球蛋白的含量。用ELISA即可成功解決這個問題，且同時可完成含量與活性的檢測。以辣根過氧化物酶標記不同動物肌肉和血清球蛋A抗血清檢查牛肉、馬肉、豬肉、羊肉和駝肉，檢出率均在95﹪以上，經(jīng)與其他血清學方法比較，證實用該法鑒別不同肉類具有較高的敏感性和特異性，而且方法簡便，設備簡單，判斷指標客觀真實。目前，ELISA可檢測14種畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和馬肉等，在摻假率為1﹪時即可檢出。對試劑的選擇性高,很難同時分析多種成分對結構類似的化合物有一定

7、程度的交叉反應分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難缺陷許多學者致力于改進和完善這種技術，重點在多克隆抗體轉向單克隆抗體，純化抗體和抗原，改進抗體的載體和反應環(huán)境，定量方式等幾個方面。我們相信隨著免疫技術的不斷提高，ELISA在食品中的應用前景相當廣闊。組員：謝謝！