高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究

高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究

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1、高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究【摘要】目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量測(cè)定方法。方法使用KromasiL-C18柱,甘草苷采用乙腈-%醋酸(20:80)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)27nm,柱溫為室溫;甘草酸流動(dòng)相為甲醇-·L-1乙酸銨溶液-冰乙酸(67∶32∶1),檢測(cè)波長(zhǎng)25nm,柱溫為室溫。二者流速均為ml·min-1,采用外標(biāo)法定量測(cè)定。結(jié)果甘草苷在~2μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;甘草酸在6~3μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;甘草苷和甘草酸的平均回收率分別為%和%,其RSD值分別為%和%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,線性相關(guān)系數(shù)良好,且穩(wěn)定性和重復(fù)性好,

2、適用于甘草黃酮粗提物及純化物中甘草苷和甘草酸的含量測(cè)定。【關(guān)鍵詞】高效液相色譜;甘草苷;甘草酸Abstract:ObjectiveToestablishmethodfordeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidby(×200mm,μm)wasused,HPLCanalysisforliquiritinwasperformedwithroomtemperatureandthemobilephaseconsistedof%glacialaceticacid(20∶80),thedetectionwavelengthwasat7nm;H

3、PLCanalysisglycyrrhizicacidwasperformedwithroomtemperatureandthemobilephaseconsistedof·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid(67∶32∶1),thedetectionwavelengthwasat5nm.Theflowratewasml·min-1.ResultsThelinearrangeofliquiritinwasobtained~27μg·ml-1(r=);thelinearrangeofglycyrrhizicacidwasobtainedbet

4、ween~36μg·ml-1(r=);theaveragerecoveryofliquiritinandglycyrrhizicacidwere%and%respectivelywithcorrespondingRSDof%and%.ConclusionThismethodissimple,convenientstable,repeatableandaccuratewithgoodlinearrelationship.Itissuitableforthedeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidinextractionandpuri

5、ficationoflicoriceflavonoid.Keywords:HPLC;Liquiritin;Glycyrrhizicacid甘草是新疆蘊(yùn)藏量大、藥用價(jià)值高的一種荒漠草原藥用植物,其主要有效成分為甘草酸和黃酮類化合物。甘草黃酮具有明顯的抗腫瘤、抗?jié)?、抗菌、抗變態(tài)反應(yīng)、降血脂和鎮(zhèn)痛的作用,并對(duì)愛滋病病毒有很強(qiáng)的抑制增殖作用[1,2],是甘草有效成分開發(fā)的熱點(diǎn)。經(jīng)典的黃酮含量測(cè)定方法,是以蘆丁為對(duì)照品,采用紫外分光光度法測(cè)定[3~5],但此方法用于甘草黃酮的測(cè)定尚有諸多不足之處。甘草黃酮的主要成分甘草苷,是反映甘草黃酮內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)[6]。本研究以甘草苷為對(duì)照

6、品,采用HPLC法測(cè)定甘草黃酮含量的方法,同時(shí)研究?jī)?yōu)化以HPLC測(cè)定甘草酸含量的方法,以期為甘草有效成分的綜合開發(fā)利用和質(zhì)量監(jiān)控提供新的方法和思路。1儀器與材料儀器LC-10A高效液相色譜儀(日本島津);SPD-10A可變紫外檢測(cè)器(日本島津);萬(wàn)分之一天平;KQ-250B型超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)。材料甘草(石河子天德中藥廠)。甘草苷對(duì)照品、甘草酸單銨鹽對(duì)照品(均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所);95%乙醇()、冰醋酸()、乙酸胺()、甲醇、乙腈。方法與結(jié)果.1色譜分析條件.甘草苷檢測(cè)條件色譜柱為KromasiL-C18;流動(dòng)相為乙腈-%醋酸(20∶80);紫外檢測(cè)波

7、長(zhǎng):27nm;流速ml·min-1;柱溫為室溫;進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物的色譜圖見圖1~2。.甘草酸檢測(cè)條件色譜柱為KromasiL-C18;流動(dòng)相為甲醇-·L-1乙酸銨溶液-冰醋酸(67∶32∶1);紫外檢測(cè)波長(zhǎng)25nm;流速ml·min-1;柱溫為室溫;進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物分離的色譜圖見圖3~4。.2對(duì)照品及供試品溶液的配制.對(duì)照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸單銨鹽對(duì)照品適量

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