高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究論文

高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究論文

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1、高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究論文【摘要】目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量測(cè)定方法。方法使用KromasiL-C18(4.6mm×200mm,5μm)柱,甘草苷采用乙腈-0.5%醋酸(20:80)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)276nm,柱溫為室溫;甘草酸流動(dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨溶液-冰乙酸(67∶32∶1),檢測(cè)波長(zhǎng)252nm,柱溫為室溫。二者流速均為1.0ml·min-1,采用外標(biāo)法定量測(cè)定。結(jié)果甘草苷在2.7~27μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r=0.9997);甘草酸在6~36μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性

2、關(guān)系(r=0.9998);甘草苷和甘草酸的平均回收率分別為101.4%和101.3%.freelethodfordeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidbyHPLC.MethodsKromasil-C18column(4.6mm×200mm,5μm)edtemperatureandthemobilephaseconsistedofacetonitrile-0.5%glacialaceticacid(20∶80),.freel;HPLCanalysisglycyrrhizicacidedtemp

3、eratureandthemobilephaseconsistedofmethanol-0.2mol·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid(67∶32∶1),thedetection.Theflol·min-1.ResultsThelinearrangeofliquiritinl-1(r=0.9997);thelinearrangeofglycyrrhizicacidl-1(r=0.9998);theaveragerecoveryofliquiritinandglycyrrhizicacidethodis

4、simple,convenientstable,repeatableandaccurateinationofliquiritinandglycyrrhizicacidinextractionandpurificationoflicoriceflavonoid.KeyasiL-C18(4.6mm×200mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈-0.5%醋酸(20∶80);紫外檢測(cè)波長(zhǎng):276nm;流速1.0ml·min-1;柱溫為室溫;進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物的色譜圖見(jiàn)圖1~2。2.1.2甘草酸檢

5、測(cè)條件色譜柱為KromasiL-C18(4.6mm×200mm,5μm);流動(dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨溶液-冰醋酸(67∶32∶1);紫外檢測(cè)波長(zhǎng)252nm;流速1.0ml·min-1;柱溫為室溫;進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物分離的色譜圖見(jiàn)圖3~4。2.2對(duì)照品及供試品溶液的配制2.2.1對(duì)照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸單銨鹽對(duì)照品適量,精密稱(chēng)定,用流動(dòng)相配制成濃度為54μg·ml-1的甘草苷對(duì)照品溶液和120μg·ml-1的甘草酸單銨鹽對(duì)照品溶液。2.2.2供試品溶液的制備

6、精密稱(chēng)取甘草黃酮提取物適量,用相應(yīng)的流動(dòng)相溶解,定溶于10ml量瓶中,作為甘草苷供試品溶液。精密稱(chēng)取甘草黃酮提取物適量,用相應(yīng)的流動(dòng)相溶解,定溶于10ml量瓶中,作為甘草酸供試品溶液。2.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇以流動(dòng)相為參比溶液,在200~400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別對(duì)甘草苷和甘草酸對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描,結(jié)果表明,甘草苷在276nm處有一最大吸收峰,甘草酸在252nm處有一最大吸收峰,所以選定276nm為甘草苷的檢測(cè)波長(zhǎng),252nm為甘草酸的檢測(cè)波長(zhǎng)。2.4線性關(guān)系的考察精密吸取甘草苷對(duì)照品儲(chǔ)備液0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.0

7、0ml于10ml量瓶中,用20%乙腈定容至刻度,搖勻;再精密吸取甘草酸單銨鹽對(duì)照品儲(chǔ)備液0.50,1.00,1.50,2.00,2.50,3.00ml于10ml量瓶中,用流動(dòng)相定容至刻度,搖勻;分別按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積A(μV·s)對(duì)進(jìn)樣濃度C(μg·ml-1)作回歸統(tǒng)計(jì),結(jié)果:甘草苷在2.7~27μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好,回歸方程:A=24962C+7161.1,r=0.9997。甘草酸在6~36μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好,回歸方程為:A=23653C+23125,r=0.9998。2.5精密度實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶

8、液,重復(fù)進(jìn)樣6次,求得甘草苷的RSD為0.74%,甘草酸的RSD為0.92%,說(shuō)明本方法精密度良好。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按“2.2.2”項(xiàng)制備同一批號(hào)供試品溶液6份,按擬定的色譜條件

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