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《高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、高效液相色譜法測(cè)定甘草苷和甘草酸含量的研究【摘要】目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量測(cè)定方法。方法使用KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）柱，甘草苷采用乙腈-0.5%醋酸(20:80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，柱溫為室溫；甘草酸流動(dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨溶液-冰乙酸(67∶32∶1)，檢測(cè)波長(zhǎng)252nm，柱溫為室溫。二者流速均為1.0ml·min-1，采用外標(biāo)法定量測(cè)定。結(jié)果甘草苷在2.7～27μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9997）；甘草酸在6～36μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9
2、998）；甘草苷和甘草酸的平均回收率分別為101.4%和101.3%，其RSD值分別為1.18%和1.22%。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，線性相關(guān)系數(shù)良好，且穩(wěn)定性和重復(fù)性好，適用于甘草黃酮粗提物及純化物中甘草苷和甘草酸的含量測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜；甘草苷；甘草酸Abstract：ObjectiveToestablishmethodfordeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidbyHPLC.MethodsKromasil-C18column(4.6mm×200mm,5μm)edtemperaturea
3、ndthemobilephaseconsistedofacetonitrile-0.5%glacialaceticacid(20∶80),thedetection;HPLCanalysisglycyrrhizicacidedtemperatureandthemobilephaseconsistedofmethanol-0.2mol·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid(67∶32∶1),thedetection.Theflol·min-1.ResultsThelinearrangeofliquiritinl-1(r=
4、0.9997);thelinearrangeofglycyrrhizicacidl-1(r=0.9998);theaveragerecoveryofliquiritinandglycyrrhizicacidethodissimple,convenientstable,repeatableandaccurateinationofliquiritinandglycyrrhizicacidinextractionandpurificationoflicoriceflavonoid.KeyasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.5
5、%醋酸(20∶80)；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm；流速1.0ml·min-1；柱溫為室溫；進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物的色譜圖見(jiàn)圖1～2。2.1.2甘草酸檢測(cè)條件色譜柱為KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨溶液-冰醋酸(67∶32∶1)；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)252nm；流速1.0ml·min-1；柱溫為室溫；進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品和甘草黃酮粗提物分離的色譜圖見(jiàn)圖3～4。2.2對(duì)照品及供試品溶液的配制2.
6、2.1對(duì)照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸單銨鹽對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相配制成濃度為54μg·ml-1的甘草苷對(duì)照品溶液和120μg·ml-1的甘草酸單銨鹽對(duì)照品溶液。2.2.2供試品溶液的制備精密稱(chēng)取甘草黃酮提取物適量，用相應(yīng)的流動(dòng)相溶解，定溶于10ml量瓶中,作為甘草苷供試品溶液。精密稱(chēng)取甘草黃酮提取物適量，用相應(yīng)的流動(dòng)相溶解，定溶于10ml量瓶中，作為甘草酸供試品溶液。2.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇以流動(dòng)相為參比溶液，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別對(duì)甘草苷和甘草酸對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，甘草苷在276nm處有一最大吸收峰，甘草酸在252nm處有
7、一最大吸收峰，所以選定276nm為甘草苷的檢測(cè)波長(zhǎng)，252nm為甘草酸的檢測(cè)波長(zhǎng)。2.4線性關(guān)系的考察精密吸取甘草苷對(duì)照品儲(chǔ)備液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10ml量瓶中，用20%乙腈定容至刻度，搖勻；再精密吸取甘草酸單銨鹽對(duì)照品儲(chǔ)備液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml于10ml量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻；分別按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積A（μV·s）對(duì)進(jìn)樣濃度C（μg·ml-1）作回歸統(tǒng)計(jì)，結(jié)果：甘草苷在2.7～27μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程：A=24962
8、C+7161.1，r=0.9997。甘草酸在6～36μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為：
