高效液相色譜法測定甘草苷和甘草酸含量—科標檢測

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1、高效液相色譜法測定甘草苷和甘草酸含量甘草是蘊藏量大、藥用價值高的一種荒漠草原藥用植物，其主要有效成分為甘草酸和黃酮類化合物?？茦藱z測研究院承接中藥材及其他保健產(chǎn)品的有效成分和功效檢測。為保健品的發(fā)展提供堅實的科學依據(jù)。在2014年幫助客戶論文課題達到200余篇，為客戶提供檢測數(shù)據(jù)，檢測方法，檢測圖譜等論文需要的資料。以下是高效液相色譜法測定甘草苷和甘草酸含量介紹：目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量測定方法。該方法操作簡便、準確，線性相關(guān)系數(shù)良好，且穩(wěn)定性和重復性好，適用于甘草黃酮粗提物及純化物中甘草苷和甘草酸的含量測定。經(jīng)典的黃酮含量測定方法，是以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定，但此

2、方法用于甘草黃酮的測定尚有諸多不足之處。甘草黃酮的主要成分甘草苷，是反映甘草黃酮內(nèi)在質(zhì)量的一個重要指標［6］。本研究以甘草苷為對照品，采用HPLC法測定甘草黃酮含量的方法，同時研究優(yōu)化以HPLC測定甘草酸含量的方法，以期為甘草有效成分的綜合開發(fā)利用和質(zhì)量監(jiān)控提供新的方法和思路。1儀器與材料1.1儀器：高效液相色譜儀；可變紫外檢測器；萬分之一天平；超聲波清洗器。1.2材料甘草。甘草苷對照品、甘草酸單銨鹽對照品；95%乙醇、冰醋酸、乙酸胺、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）。2方法與結(jié)果2.1色譜分析條件2.1.1甘草苷檢測條件色譜柱為KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流動

3、相為乙腈-0.5%醋酸（20∶80）；紫外檢測波長：276nm；流速1.0ml·min-1；柱溫為室溫；進樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計算應不低于4000。對照品和甘草黃酮粗提物的色譜圖見圖1～2。2.1.2甘草酸檢測條件色譜柱為KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流動相為甲醇-0.2mol·L-1乙酸銨溶液-冰醋酸（67∶32∶1）；紫外檢測波長252nm；流速1.0ml·min-1；柱溫為室溫；進樣量20μl。理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計算應不低于2000。2.2對照品及供試品溶液的配制2.2.1對照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸單銨鹽對照品適量，精密稱定，用流

4、動相配制成濃度為54μg·ml-1的甘草苷對照品溶液和120μg·ml-1的甘草酸單銨鹽對照品溶液。青島科標檢測研究院2.2.2供試品溶液的制備精密稱取甘草黃酮提取物適量，用相應的流動相溶解，定溶于10ml量瓶中，作為甘草苷供試品溶液。精密稱取甘草黃酮提取物適量，用相應的流動相溶解，定溶于10ml量瓶中，作為甘草酸供試品溶液。2.3檢測波長的選擇以流動相為參比溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)分別對甘草苷和甘草酸對照品溶液進行掃描，結(jié)果表明，甘草苷在276nm處有一最大吸收峰，甘草酸在252nm處有一最大吸收峰，所以選定276nm為甘草苷的檢測波長，252nm為甘草酸的檢測波長。2.4線性

5、關(guān)系的考察精密吸取甘草苷對照品儲備液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10ml量瓶中，用20%乙腈定容至刻度，搖勻；再精密吸取甘草酸單銨鹽對照品儲備液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml于10ml量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻；分別按“2.1”項色譜條件進行測定，以峰面積A（μV·s）對進樣濃度C（μg·ml-1）作回歸統(tǒng)計，結(jié)果：甘草苷在2.7～27μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程：A=24962C7161.1，r=0.9997。甘草酸在6～36μg·ml-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為：A=23653C23125，r=0.99

6、98。2.5精密度實驗取同一供試品溶液，重復進樣6次，求得甘草苷的RSD為0.74%，甘草酸的RSD為0.92%，說明本方法精密度良好。2.6重復性實驗按“2.2.2”項制備同一批號供試品溶液6份，按擬定的色譜條件分別測定甘草苷和甘草酸的含量，測得甘草苷的RSD為1.32%，甘草酸的RSD為1.04%，表明重復性較好。2.7穩(wěn)定性實驗配制同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10，12，24，36，48h后進樣，求得甘草苷的RSD為1.44%，甘草酸的RSD為0.89%，表明樣品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。2.8回收率實驗取已知含量的同一供試品溶液各5份，分別精密加入同一濃度同一體積的甘草苷對照

7、品溶液，甘草酸單銨鹽對照品溶液，混勻，進樣，按上述方法測定甘草酸和甘草苷的含量，測得甘草苷和甘草酸的平均回收率分別為101.4%，101.3%；RSD值分別為1.18%，1.22%。表明本實驗所確定的HPLC法進行甘草苷和甘草酸的含量分析，準確度較高。結(jié)果見表1。表1甘草酸和甘草苷的回收率實驗結(jié)果2.9樣品測定分別精密稱定甘草黃酮粗提物和純化物各3份，適量，按“2.2.2”項方法制備所需的供試品溶液，按“2.