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1、柿葉總黃酮提取工藝的研究作者：張秀梅曾祖平王永紅【摘要】 目的對(duì)柿葉中總黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法，以總黃酮含量為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時(shí)間３種因素進(jìn)行了研究。結(jié)果將柿葉最粗粉用２５倍８０％乙醇提?。创?，可以獲得較高的提取率。結(jié)論此工藝有效成分提取率較高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行?！娟P(guān)鍵詞】柿葉總黃酮正交實(shí)驗(yàn)提取工藝Abstract:ObjectiveＴｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｉｎＰｅｒｓｉｍｍｏｎＬｅａｖｅｓ．MethodsＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄｖｏｌｕｍｅｏｆａ
2、ｌｃｏｈｏｌ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｗｅｒｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓａｓｔｈｅｍａｒｋｅｒ．ResultsＴｈｅｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｗａｙｔｏｅｘｔｒａｃｔｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓｗａｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈ２５ｔｉｍｅｓａｍｏｕｎｔｏｆ８０％ａｌｃｏｈｏｌｕｎｄｅｒｒｅｆｌｕｘｆｏｒ４ｔｉｍｅｓ．ConclusionＴｈｉｓｍｅｔｈｏｄｏｂｔａｉｎｓｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｉｔｉｓｓｔａｂｌｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ．Keyword
3、s:Ｐｅｒｓｉｍｍｏｎｌｅａｖｅｓ；Ｔｏｔａｌｆｌａｖｏｎｅｓ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ 柿樹是我國的重要經(jīng)濟(jì)樹種之一，柿葉為柿樹科落葉喬木植物柿DiospyroskakiＬ．ｆ．的新鮮或干燥葉片。國內(nèi)外研究表明，柿葉制劑、柿葉茶及柿葉提取物具有降壓、利尿、抑菌、止血、降脂、抑制癌瘤生長等多方面的生理活性?，F(xiàn)代研究表明，柿葉中的主要有效成分為黃酮類，大多以苷的形式存在［１］，其具有抗急性腦缺血損傷神經(jīng)保護(hù)作用，對(duì)心血管系統(tǒng)有增加冠脈流量、降低血壓、降低心肌耗氧量、改善全身血液循環(huán)作用，能增加小鼠對(duì)窒息性缺氧的耐力，并對(duì)大鼠急性心
4、肌缺血有一定的保護(hù)作用。此外，柿葉黃酮還有抗氧化清除自由基、抗過敏、保肝［2］、抗炎、抗菌、抗腫瘤等功能，在防治中老年人腦動(dòng)脈硬化、預(yù)防腦血栓形成、防治老年人癡呆和其它神經(jīng)退行性疾病、皮膚抗衰老、美容等方面有廣泛的開發(fā)應(yīng)用前景［3］。為了有效利用柿葉所含的黃酮類物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)以總黃酮含量為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選了總黃酮最佳提取條件。1儀器與試藥１．１儀器ＵＶ－２２０１紫外可見分光光度計(jì)；傾斜式高速萬能粉碎機(jī)；ＰＢ２０３－Ｎ電子精密天平；ＡＪ１５０Ｌ電子精密天平。１．２試藥實(shí)驗(yàn)用藥材采自北京市昌平區(qū)，落葉晾干，經(jīng)鑒定為柿樹科柿屬柿DiospyrosKakiＬ．ｆ．；蘆丁對(duì)照
5、品；ＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ等均為分析純。方法與結(jié)果２．１因素水平表乙醇作為提取溶劑，對(duì)乙醇濃度、溶劑量及提取次數(shù)和時(shí)間３種因素進(jìn)行考察，每種因素分為３個(gè)水平，結(jié)果見表１。.2供試品溶液的制備精密稱取柿葉最粗粉１ｇ共９份，按照表２Ｌ９正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，用對(duì)應(yīng)濃度和體積的乙醇回流提取相應(yīng)次數(shù)和時(shí)間。回流結(jié)束后合并提取液，放冷，抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至１００ｍｌ或２００ｍｌ量瓶中，分別以其相應(yīng)的提取溶劑定容，過微孔濾膜，作為供試品溶液。表1正交設(shè)計(jì)因素水平表2L9正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析.3對(duì)照品溶液的制備精密稱?。保玻啊娓稍镏梁阒氐奶J丁對(duì)照品０．０８２５ｇ于１００ｍｌ量瓶中，７０％乙醇
6、超聲溶解，定容至刻度，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液０．８２５ｍｇ·ｍｌ－１。.4顯色試劑及測定波長的選擇Ａｌ３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ顯色法［４］：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液０．５ｍｌ和供試液１＃、４＃、７＃各適量至２５ｍｌ量瓶中，分別加入５％ＮａＮＯ２１．０ｍｌ，放置６ｍｉｎ，然后加入１０％Ａｌ３１．０ｍｌ，混勻，放置６ｍｉｎ，再加入４．３％ＮａＯＨ１０ｍｌ，用７０％乙醇定容至刻度，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜?！ 。粒欤茫欤筹@色法［５］：精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液０．１ｍｌ和供試液１＃、４＃、７＃各適量至１０ｍｌ量瓶中，分別加入０．１ｍｏｌ／ＬＡｌＣｌ３·６Ｈ２Ｏ１．０
7、ｍｌ，用５０％乙醇定容至刻度，搖勻，放置１５ｍｉｎ。在１９０～７００ｎｍ范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜?！ ”容^上述兩種顯色法，用Ａｌ３－ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ顯色后，明顯生成紅色絮狀沉淀，此法不宜采用；而ＡｌＣｌ３顯色后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的λｍａｘ＝４１０ｎｍ，３個(gè)樣品溶液的λｍａｘ＝４００～４１０ｎｍ，故選擇ＡｌＣｌ３顯色后４１０ｎｍ測定吸光度。.5顯色穩(wěn)定性考察精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液０．３ｍｌ和供試液４＃１．０ｍｌ，依法顯色后放置不同時(shí)間，測定吸光度，結(jié)果見表３，吸光度RSD分別為０．２％和０．３％，可見蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液和供試液４＃顯色后４ｈ內(nèi)基本穩(wěn)定。.6
