柴胡莖葉總黃酮正交提取工藝的研究

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1、柴胡莖葉總黃酮正交提取工藝的研究北柴胡（BupleurumchinenseDC.）為傘形科柴胡屬植物，收載于中國藥典，為藥用柴胡的主要種源。柴胡具有驅散退熱、舒肝生陽之功效，主治感冒發(fā)熱、寒熱往來、瘧疾、胸肋脹痛、月經不調及子宮脫垂等癥?，F代藥理研究證明柴胡具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、免疫增強、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用，具有極高的藥用研究價值，黃酮類化合物在自然界分布廣泛,具有抗氧化、抑菌消炎和抗衰老等功效。柴胡總黃酮具有較強的抗流感病毒作用，而且具有較好的抗炎、降溫效果，對多種細胞有較強的抑制或殺滅作用。本文利用不同濃度的乙醇提取，通過正交試驗確

2、定北柴胡莖中總黃酮的最佳提取工藝條件，為更有效的開發(fā)和利用柴胡資源提供理論參考和實驗指導。1材料與儀器1.1材料本品為傘形科植物柴胡（BupleurumchinenseDC.）或狹葉柴胡（Bupleurumscorzoner-ifoliumWilId.）的干燥根。按性狀不同，分別習稱“北柴胡”及“南柴胡”。1.2試劑蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉和硝酸鋁均為分析純。1.3儀器電熱恒溫水浴鍋（H-H-S21-6C,上海醫(yī)療器械五廠）；電子分析天平（FC204,上海精科實業(yè)有限公司）；UV-762紫外分光光度計（上海精密科學儀器

3、有限公司）；旋轉蒸發(fā)器（上海亞蓉生化儀器廠）；snz-D（in）循環(huán)水式真空泵，索式提取器，電熱鼓風干燥箱；植物粉碎機（FZ102,天津市泰斯特儀器有限公司）2方法2.1柴胡莖葉總黃酮的薄層檢測硅膠薄板制作稱取4g硅膠G置于研缽中，加入0.5%的竣甲基纖維素鈉溶液12ml,研磨15min后鋪于20x10cm的干凈玻璃平板上，要求平整無氣泡，然后晾干即可。展開劑配制取展開劑氯仿:甲醇：水=7:2.5:0.5的比例配制100ml（70:25:5）,取下層液作為展開劑。薄板活化：將制好的硅膠薄板在105°C下活化30mino點樣：點樣點距板子底端1.5cm左右，所有

4、點樣點位于同一直線上，盡可能向中間靠攏，每個點樣點點樣約20mU點樣點盡可能小。飽和：將板子不沒入層析缸內的展層劑中，在展層劑的蒸氣中飽和約0.5h。層析：將板子下端插入展層劑中進行展開，當展層劑前沿距板子上端約l?5cm時取出板子，自然晾干。觀察：紫外燈(365nm)下觀察，Rf:,層析圖譜如下。展開取出晾干后在紫外燈(365nm)下觀察，可見熒光、黃綠色熒光等4—6個斑點，主要為柴胡莖葉總黃酮各種戒及戒元，各斑點Rf在0?5以上分布。2.2紫外分光光度法測定柴胡莖葉總黃酮的含量2.2.1標準液的配制：精密稱取120°C干燥恒重的蘆丁標準品10mg,置50m

5、L容量瓶中，用60%乙醇溶解并定容得到濃度為0.2nig/mL的蘆丁標準溶液。2.2.2標準曲線的繪制:精密量取標準溶液各0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于25mL容量瓶中，分別加60%乙醇溶液至10mL,再依次加入ln)L5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置6min后加入1mL10%硝酸鋁溶液，搖勻，放置6min后加入4%氫氧化鈉溶液1mL,再加60%乙醇定容，搖勻，放置15min后在510nm處測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標，蘆丁濃度(mg/niL)為橫坐標，制作標準曲線。得到回歸方程Y=16?4125X-0?0105,R2=0-9998

6、。2.2.3樣品溶液的制備和黃酮含量的測定：準確稱取陰干粉碎的北柴胡莖葉20g,按單因素實驗和正交試驗中不同的提取條件利用索氏提取器回流提取。提取液減壓濃縮成膏狀，用50mL溫水充分溶解置于250mL分液漏斗，用等體積石油瞇萃取3次以除去色素和部分脂溶性成分。水相合并后減壓濃縮成膏狀于60°C真空干燥箱中干燥至恒重，準確稱取干燥粉末20mg用60%乙醇溶解并定容于10mL容量瓶中。依照“2.2.2”項下方法測定吸光度，代入回歸方程中計算總黃酮的含量,并計算總黃酮的得率；總黃酮的得率(％)=(提取液中總黃酮濃度x提取液體積)/對應的原料重量X100%。在此過程中

7、分別考察不同乙醇濃度、不同料液比、不同提取時間和溫度對總黃酮提取的影響。然后結合正交試驗確定最佳提取工藝。3柴胡莖葉總黃酮提取工藝確定3.1柴胡莖葉提取工藝效果的因素實驗1.1.1提取溶劑濃度及提取方法的選擇提取溶劑的選擇主要是根據溶劑的極性及其共存雜質的極性大小來判斷。天然有機化合物在溶劑的溶解應遵循“相似相溶”規(guī)律，極性化合物傾向于溶于極性溶劑，非極性化合物傾向于溶于非極性溶劑。從北柴胡分離得8個黃酮類化合物：柴胡色原酮酸，蘆丁，榊皮素，異鼠李素，異鼠李素3-0-葡萄糖戒,葛根素,7,4，二務基異黃酮7-0-p-D-葡萄糖式，色氨酸。本實驗用不同濃度乙醇或

8、甲醇進行熱回流、超聲提取平行對比實驗。