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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)·1470··干細(xì)胞與組織工程·ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery,December2008，V01．22，No．12hBMSCs誘導(dǎo)分化類髓核細(xì)胞豐干鈞1劉浩1陳曉禾2李秀群2趙獻(xiàn)峰1梁濤1【摘要】目的探討人椎間盤細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的分子表型差異，分析hBMSCs經(jīng)TGF．p，和BMP．7聯(lián)合誘導(dǎo)后能否分化為軟骨細(xì)胞和髓核細(xì)胞。方法取9例自愿捐贈(zèng)者髂嵴骨髓20～40mL分離培養(yǎng)hBMSCs。取第4代hBMSCs行三維微球培養(yǎng)。根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入的生長(zhǎng)因子不同，實(shí)驗(yàn)分成4組，分別為加入10ng
2、／mLTGF．B，組(A組)、200ng／mLBMP．7組(B組)、同時(shí)加入兩種生長(zhǎng)因子組(C組)以及空白對(duì)照組(D組)。于培養(yǎng)后21d，行組織學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察：于培養(yǎng)后4、21d進(jìn)行PCR檢測(cè)I、II、X型膠原、蛋白多糖和SOX9基因的表達(dá)。結(jié)果培養(yǎng)后2ld，HE染色示A組和C組細(xì)胞呈軟骨細(xì)胞樣形態(tài)特征，甲苯胺藍(lán)染色及免疫組織化學(xué)染色I(xiàn)I型膠原表達(dá)呈陽(yáng)性。B組和D組細(xì)胞形態(tài)無明顯改變，PCR檢測(cè)示培養(yǎng)后21d，A、C組SOX9、蛋白多糖、I型膠原及II型膠原表達(dá)較4d時(shí)明顯增加(P<0．05)。B、D組I型膠原表達(dá)較4d時(shí)明顯增加(戶<0．05)，SOX9、蛋白
3、多糖及II型膠原較4d時(shí)無明顯變化(P>0．05)。其中僅A組X型膠原表達(dá)呈陽(yáng)性。結(jié)論TGF．13，和BMP．7聯(lián)合應(yīng)用能促進(jìn)hBMSCs分化更接近于椎間盤細(xì)胞，可能為椎間盤組織工程提供種子細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】椎間盤組織工程hBMSCs誘導(dǎo)分化BMP．7TGF．B，軟骨形成中圖分類號(hào)：R318Q813文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADIFFERENTIATIONOFINTERVERTEBRALNUCLEUSPULPOSUS-LIKECELLSFROMhBMSCs／FENGGanjunl．LIUHa01，CHENXiaohe2,LIXiuqun2,ZHAOXianfeng／，LIANGTa0
4、1．1D印aamentofOrthopaedics,2DivisionofStemCellandTissueEngineering,StateKeyLaboratoryofBiotherapy,WestChinaHospit甜，SichuanUniversity,ChengduSichuan，610041．P．R．China．Correspondingauthor：LIUHao，E—mail：Liuha06304@163．com【Abstract】ObjectiveTocomparethemolecularphenotypeofhumanintervertebrald
5、isccellsandarticularchondrocytesandtoanalyzewhetherhBMSCscandifferentiateintobothchondrocytesandnucleuspulposuscellsaftercombinedinductionofTGF一13，andBMP一7invitro．MethodsThecellswiththecharacteristicsofhBMSCswereisolatedfrommarrowaspiratesofthevolunteerdonors’iliaccrest．Humanbonemarroww
6、asremovedandfractionated，andadherentcellcultureswereestablished．The4thpassagecellswerethentranslatedintoanaggregateculturesysteminaserum—freemedium．ThepelletculturesofhBMSCsweredividedintofourgroups：10ng，mLTGF-133group(groupA)，200ng／mLBMP．7group(groupB)，combinationgroupofTGF-133andBMP一7
7、(groupC)andblankgroupasthecontrol(groupD)．Histologicalobservation，RT-PCRandRQ—PCRwereappliedtomeasuretheexpressionsofcollagentypeI，II，X，aggrecanandSOX9onthe4thand21stdayaftercellinduction，respectively．ResultsAswasshownbyhistologicalobservation，theinducedcellsexpressedthefeature
