資源描述：
《人il8基因?qū)m頸癌侵襲和血管生成能力影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人IL-8基因?qū)m頸癌侵襲和血管生成能力影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名：張娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：李萬(wàn)勝20090301中文摘要人lL-8基因?qū)m頸癌侵襲和血管生成能力影響的實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：宮頸癌是全球發(fā)病率居第二位的婦女惡性腫瘤，在我國(guó)的發(fā)病率居首位【l】，其高發(fā)區(qū)連接成片，且發(fā)病人群有年輕化的趨勢(shì)【2】，成為嚴(yán)重威脅婦女健康的疾病之一。宮頸癌的發(fā)生j發(fā)展是一個(gè)由量變到質(zhì)變，由漸變到突變的過(guò)程。局部浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不僅影響手術(shù)效果，而且直接關(guān)系患者預(yù)后。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌的主要轉(zhuǎn)移途徑，在早期即可發(fā)生。有文獻(xiàn)報(bào)道，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者
2、五年生存率為82．2％．有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者五年生存率為50．8％E31。IL．8是1987年Yoshimur等【4】發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)趨化因子。當(dāng)時(shí)被命名為單核細(xì)胞衍生的中性粒細(xì)胞趨化因子，是與炎癥相關(guān)的CXC趨化因子。隨著對(duì)IL．8及其受體生物學(xué)活性和作用機(jī)制研究的深入，Strieter等【5】發(fā)現(xiàn)IL．8的NH2末端有一谷氨酸一亮氨酸一精氨酸(Glu．Leu．Arg)組成的三聯(lián)體氨基酸基序一ELR基序，該基序在IL．8促血管生成中起重要作用。Murphy等1611乜發(fā)現(xiàn)IL．8參與腫瘤血管形成，與腫瘤的侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。隨后研究者在小細(xì)胞肺癌【71和胃癌【81及卵巢癌
3、【9】等也得出了類似的結(jié)果，提示IL．8參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。IL．8可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增生，使腫瘤細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞遷移【l川；調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞及周圍基質(zhì)細(xì)胞分泌MMP．2，MMP．9并增強(qiáng)其活性，從而促進(jìn)膠原酶活性，提高腫瘤細(xì)胞的體外侵襲力【lo’11】。IL．8也可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生、遷移、抑制中文摘要其自發(fā)性凋亡及增加血管的通透性【11】，有利于腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。另外，還有研究顯示淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞可通過(guò)分泌趨化因子吸引腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而主動(dòng)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移【12】。但對(duì)IL．8在宮頸癌中的作用研究甚少，Tjiong等人【l3】通過(guò)比較宮頸分泌物和陰道沖洗液中I
4、L．8的水平認(rèn)為宮頸癌和CIN病例陰道局部可能產(chǎn)生高水平的IL．8和IL．6，這些高水平的細(xì)胞因子有可能對(duì)局部炎癥反應(yīng)和腫瘤生長(zhǎng)有一定作用。日本的Fujimot等人【14】的研究證實(shí)IL．8與宮頸癌的血管生成有關(guān)，在宮頸癌I．Ⅳ期的發(fā)展過(guò)程中，血清IL．8的水平也隨之增高，該研究雖然證實(shí)了IL．8與宮頸癌的血管生成及預(yù)后相關(guān)，但并未闡明其分子作用機(jī)制。吳素慧等【l5】對(duì)早期宮頸鱗癌進(jìn)行了cDNA基因芯片篩查，結(jié)果表明IL．8在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的表達(dá)較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織高3．4倍，推測(cè)其可能在早期宮頸癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中起重要作用。盡管宮頸癌的治療研究己近百
5、年，成績(jī)顯著，但其療效還未能達(dá)到普遍接近“早期宮頸癌5年生存率90％一100％"這樣的水平。因此，在宮頸癌的治療過(guò)程中，需要充分考慮影響預(yù)后的變異因素，按“個(gè)體化”治療的原則設(shè)計(jì)針對(duì)性治療方案，改進(jìn)治療，提高療效。近些年來(lái)，隨著細(xì)胞工程和基因工程技術(shù)的發(fā)展，腫瘤免疫治療亦得以迅猛發(fā)展，細(xì)胞因子基因治療成為目前研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察IL．8對(duì)宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響作用，探索以IL．8為靶點(diǎn)的對(duì)宮頸癌的靶向治療作用，以期為宮頸癌的診治和預(yù)后判斷提供新的指標(biāo)，也為宮頸癌的個(gè)性化治療尋求一條新的途徑。方法：中文摘要l質(zhì)粒pcDNA3．1(+)．hlL．8和pcD
6、NA3．1(+)的提取及鑒定采用分子生物學(xué)方法大量制備質(zhì)粒pcDNA3．1(+)．hlL．8和pcDNA3．1(+)，酶切鑒定，分光光度儀檢測(cè)DNA濃度。2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宮頸癌Hela細(xì)胞及抗性克隆細(xì)胞的篩選以脂質(zhì)體介導(dǎo)法將pcDNA3．1(+)／hlL．8重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不表達(dá)該目的基因的Hela細(xì)胞，G4．8篩選獲得陽(yáng)性細(xì)胞株。3RT-PCR方法鑒定，證實(shí)轉(zhuǎn)染外源性IL．8基因的Hela細(xì)胞表達(dá)IL．8情況。4檢測(cè)細(xì)胞增殖情況MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染pcDNA3．I(+)／IL．8組、pcDNA3．1(+)組與未轉(zhuǎn)染組Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖能力，繪制生長(zhǎng)增殖曲線。5Tran
7、swelldx室法檢測(cè)宮頸癌Hela細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力選用Transwell小室和Matrigel膠建立了體外侵襲模型，評(píng)價(jià)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3．I(+)／IL．8重組質(zhì)粒的宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的變化情況。Transwell小室分為上下兩室，中間以聚碳酸脂濾膜(微孔直徑為89tm)相隔，微孔允許腫瘤細(xì)胞穿越，Matrigel是大鼠ESH肉瘤細(xì)胞外基質(zhì)提取物，由Ⅳ型膠原、層粘蛋白、硫酸肝磷脂蛋白多糖及整合素等組成，其成分與組織基底膜相似，可模擬組織基底膜，用以觀察細(xì)胞同細(xì)胞外基質(zhì)間的相互作用。將Matrigel膠鋪在Transwell小室的聚碳酸脂膜上層，計(jì)數(shù)并比較穿膜
8、細(xì)胞數(shù)。結(jié)
