靈芝多糖的含量測(cè)定方法探討及改進(jìn)

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1、陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)2009年09月第32卷第5期·62·JournalofShaanxiCollegeofTraditionalChineseMedicineSep．2009Vo1．!墨靈芝多糖的含量測(cè)定方法探討及改進(jìn)楊瑞瑞李國(guó)華樊寶娟(1．陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安710061；2．陜西省人民醫(yī)院，陜西西安710100)摘要：為改進(jìn)靈芝多糖含量測(cè)定方法，通過考察配制硫酸蒽酮溶液時(shí)硫酸的濃度，確定合理的反應(yīng)條件，使反應(yīng)系統(tǒng)自行升溫，用紫外一可見分光光度法測(cè)定。改進(jìn)后的靈芝多糖含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠。

2、關(guān)鍵詞：靈芝多糖；蒽酮；紫外一可見分光光度法；含量測(cè)定中圖分類號(hào)：R284．1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1002—168X(2009)05—0O62—02靈芝收載于《中國(guó)藥典}2005年版一部?，在熱前，從8O％到98％濃度反應(yīng)程度逐漸加強(qiáng)，我國(guó)已有千年的藥用歷史，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、80％硫酸配制的蒽酮溶液反應(yīng)后溶液稍有發(fā)熱，降血糖、抗衰老等廣泛藥理活性。在對(duì)靈芝多糖的顏色為淡黃色，98％硫酸配制的蒽酮溶液反應(yīng)后含量測(cè)定過程中，發(fā)現(xiàn)按《中國(guó)藥典)2005年版一溶液產(chǎn)熱劇烈，溶液顏色為淡綠色。原標(biāo)準(zhǔn)中顯色部靈

3、芝多糖含量測(cè)定方法中規(guī)定的硫酸蒽酮溶液后在625nm測(cè)定亦為淡綠色，因此比較了不同濃配制方法配制的硫酸蒽酮溶液為一混濁液，幾乎無度硫酸配制的葸酮溶液在水浴加熱和不加熱情況法顯色測(cè)定，試驗(yàn)偏差很大，故本文進(jìn)行了探討及下與葡萄糖的反應(yīng)情況。改進(jìn)。2．2加熱條件對(duì)測(cè)定的影響按標(biāo)準(zhǔn)中方法，取1儀器及試劑對(duì)照品溶液0．5mL，90％硫酸蒽酮溶液水浴加熱島津UV一2100型可見一紫外分光光度計(jì)；蒽顯色后測(cè)定吸收度；另取對(duì)照品溶液0．5mL，加酮(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn))；硫98％硫酸蒽酮溶液顯色5min，立

4、即在冰水中冷卻酸(分析純，西安化學(xué)試劑廠生產(chǎn))；無水葡萄糖對(duì)照品(批號(hào)110833—200302，中國(guó)藥品生物制品檢5min，測(cè)定吸收度值，結(jié)果見表2。定所提供)；靈芝為市售藥材。表2加熱條件對(duì)測(cè)定的影響2實(shí)驗(yàn)方法顯色劑90％硫酸蒽酮溶液水浴加熱98％硫酸蒽酮溶液按《中國(guó)藥典》一部靈芝多糖含量測(cè)定方法中規(guī)定的硫酸蒽酮溶液配制方法(精密稱取蒽酮0．1g，加80％的硫酸溶液100mL使溶解，搖勻)配制的硫酸蒽酮溶液實(shí)際為一混濁液，無法顯色測(cè)由以上結(jié)果可以看出，98％硫酸蒽酮溶液與定。改為按硫酸體積比配制硫酸蒽酮溶

5、液，蒽酮的葡萄糖的反應(yīng)，利用濃硫酸與水反應(yīng)產(chǎn)生的熱量，溶解性明顯改善，但顯色后空白溶液、對(duì)照品溶液、足以使反應(yīng)完全，省去了水浴加熱的繁瑣，使實(shí)驗(yàn)樣品溶液均仍有不同程度的混濁，因此，對(duì)硫酸蒽更簡(jiǎn)化。酮的配制方法進(jìn)行了優(yōu)化。2．3反應(yīng)時(shí)間對(duì)吸收度值影響的考察取對(duì)照品2．1硫酸濃度的優(yōu)化取濃硫酸，按體積比分別溶液0．5mL，加98％硫酸蒽酮溶液，分別進(jìn)行配制80％、85％、90％、95％、98％的硫酸溶液，精1min、2min、5min、10min、15min的顯色反應(yīng)，立密稱取蒽酮0．1g，分別用不同濃度的硫酸溶

6、液即在冰水中冷卻5min，測(cè)定吸收度值，結(jié)果顯色反100mL使溶解，搖勻。按標(biāo)準(zhǔn)中方法，取對(duì)照品溶應(yīng)2—15min吸收度值無明顯變化，故確定反應(yīng)時(shí)液0．5mL，顯色后測(cè)定吸收度，每份同時(shí)做空白，間為5min。冰水浴中冷卻2rain即可，考慮到做標(biāo)結(jié)果見表1。表1不同硫酸濃度對(duì)蒽酮的溶解情況準(zhǔn)曲線及樣品時(shí)的方便，冷卻時(shí)間亦確定為5rain(表3及圖1)。表3反應(yīng)時(shí)間對(duì)吸收度值的影響結(jié)果時(shí)聞(min)1251015吸收度O．2860．3l3O．3l5O．3l40．3l5對(duì)照品溶液中加入不同濃度蒽酮溶液后，未加20

7、09年o9月第32卷第5期陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)Sep．2009Vo1．32No．5J0umalofShaanxiCoUegeofTraditionalChineseMedicine·63·OO0OOOOOOO0繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。弘∞∞叭∞3655553．3供試品溶液的制備取樣品粉末2g，精密稱定，置索氏提取器中，加水90mL，加熱回流提取至提取液無色，提取液轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL，加入乙醇150mL，搖勻，4℃放置12h，取出。離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至50mL量瓶

8、中，加水稀釋到刻度，搖勻，作為供試品溶液。3．4測(cè)定方法精密量取供試品溶液2mL，置時(shí)間(分鐘)10mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自圖1反應(yīng)時(shí)間對(duì)吸收度值的關(guān)系“精密加入硫酸蒽酮溶液6mL”起，依法測(cè)定吸光2．4測(cè)定時(shí)間對(duì)吸收度值的影響取對(duì)照品溶液度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出含葡萄糖的重量(mg)，計(jì)O．5mL，加98％硫酸蒽酮溶液，搖勻，反應(yīng)5min，算，即得。立即在冰水中冷卻5min，分別在