雷帕霉素抑制大鼠移植肝膽管上皮細胞增殖作用的研究

《雷帕霉素抑制大鼠移植肝膽管上皮細胞增殖作用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、雷帕霉素抑制大鼠移植肝膽管上皮細胞增殖作用的研究作者：陳莉萍戴睿武郭毅斌王曙光董家鴻'【摘要】目的探討雷帕霉素對大鼠移植肝膽管上皮細胞增殖及其周圍成纖維細胞活化的抑制作用。方法“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型，并隨機分為供肝冷保存1h組、1h組、雷帕霉素組(冷保存1h組術后給予雷帕霉素)、對照組。分別于術后1、3、7、1d檢測血清ALT、TB、ALP，免疫組化法檢測各組膽管上皮細胞增殖率及肌纖維母細胞分布，并統計各組生存率。結果冷保存1h組術后生存率明顯低于冷保存1h組(P=)，血清ALT>200IU/L、AL

2、P>160IU/L、TB>3.μmol/L，持續(xù)高于冷保存1h組(ALT【關鍵詞】雷帕霉素；肝移植；冷保存；再灌注；膽管上皮細胞；增殖【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitiveeffectofrapamycinonproliferationofbiliaryepithelialcellsandactivationofperibiliaryfibroblastafterratlivertransplantation.MethodsAfterratlivertransp

3、lantationmodelwasmadebasedon“twocuff”method,SDratswererandomlydividedintocoldpreservation(CP)for1hourgroup(CP1hourgroup),CP1hoursgroup,rapamycingroup(CP1hoursgrouptreatedwithrapamycin)andcontrolgroup.Alanineaminotransferase(ALT),totalbilirubin(TB)andalkalinep

4、hosphatase(ALP)weredeterminedatdays1,,and1afterlivertransplantation.Immunohistochemicalmethodwasusedtodetectproliferationrateofbiliaryepithelialcellsanddistributionofmyofibroblasts,andsurvivalrateofeachgroupwasalsoanalyzed.ResultsThesurvivalrateinCP1hoursgrou

5、pwassignificantlylowerthanthatinCP1hourgroup(P=).InCP1hoursgroup,serumALTwas>200IU/L,ALP>160IU/LandTB>3.μmol/L,whichweresignificantlyhigherthanthoseinCP1hourgrouprespectively(ALT【Keywords】Rapamycin;Livertransplantation;Coldpreservation;Reperfusion;Biliaryepit

6、helialcells;Proliferation肝移植術后常見的膽道并發(fā)癥為非吻合口狹窄，占所有膽道并發(fā)癥的20%［1］，而冷保存再灌注對膽管樹的直接損傷是此類并發(fā)癥重要的因素。作為肝移植過程中不可避免的病理生理過程，冷保存再灌注直接損傷膽管上皮細胞，誘導正常情況下處于細胞周期靜止狀態(tài)的膽管上皮細胞發(fā)生增殖。這種對損傷做出的修復過程極有可能并發(fā)其他膽道疾病［2］。因此研究影響膽管上皮細胞增殖的因素對于臨床防治膽道疾病具有重要意義。本研究是在大鼠原位肝移植模型基礎上，探討雷帕霉素對肝移植術后膽管上皮細胞增殖及

7、其周圍肌纖維母細胞聚集的影響，旨在為臨床防治移植肝膽道并發(fā)癥提供新的策略。1材料與方法主要試劑與儀器兔抗增殖細胞核抗原多克隆抗體、鼠抗pSTAT3tyr705單克隆抗體均購自美國SantaCruz公司；ChemMateTMEnvision免疫組化試劑盒為丹麥Dako公司產品；RPM為美國惠氏百宮制藥公司惠贈。動物模型與分組清潔級SD大鼠，體重220～250g，雄性，由第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院動物中心提供。按隨機數字表法分為4組：(1)對照組；(2)冷保存1h組：供肝冷保存1h后行原位肝移植；(3)冷保存1h組：供

8、肝冷保存1h后行原位肝移植；(4)雷帕霉素組：冷保存1h組給予靜注雷帕霉素mg/(kg·d)。大鼠原位肝移植模型制作參照劉驊等［3］的“二袖套法”原位肝移植模型并加以改良，顯微外科縫合肝上下腔靜脈、套接門靜脈及肝下下腔靜脈。利用小兒靜脈留置針內蕊作為動脈支架管，直接對合供受體肝固有動脈，完成肝動脈重建。無肝期約1min。分別于術后1、3、7、1d取材，每組樣本各8只。各組