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《hplc外內(nèi)標(biāo)法測定含量》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、采用HPLC外標(biāo)法測定梔子中梔子苷的含量儀器與試劑Aglient1100seriesHPLC儀(包括VWD檢測器、 四元恒流泵、在線脫氣機(jī)、手動進(jìn)樣器)，美國安捷倫 公司；SB3200超聲波清洗器，寧波新芝生物科技公司。 梔子苷對照品：中國藥品生物制品檢定所，供含量 測定用；甲醇、乙腈為色譜純，Merck公司；梔子藥材； 其他試劑均為分析純。實驗步驟配制溶液(1)流動相的配制。甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1，V／V)，減壓過濾并超聲波脫氣。(2)梔子苷對照品溶液的配制。稱取10．0mg梔子苷對照品，精密稱定質(zhì)量，以甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2mL
2、容量瓶巾(濃度為0．4g／L)，甲醇定容，分別精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL于10．0m1．容量瓶中，以流動相溶液定容，得濃度為0．004，0．02，0．04，0．1，0．2g／L的梔子苷對照品溶液。(3)梔子供試品溶液的配制。取本品粉末0．1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。平行處理3份。測定(1)安裝C18反相柱，按儀器操作說明依次打開色譜儀各單元的電源。(2)色譜條件。C18一ODS色譜柱(53um，
3、4．6mm×250mm)；流動相比例：甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1)；流動相流速：1．0mL／min；檢測波長：238nm。(3)換卜流動相，待基線穩(wěn)定后，采用進(jìn)樣器依次吸取濃度分別為0．004，0．02，O．04，0．1，0．2，0．4g／L的梔子苷對照品溶液各10仙L進(jìn)樣，待組分色譜峰出完后，按“停止”鍵停止分析。記錄梔子苷色譜峰面積(保留時間、峰面積)，以梔子苷進(jìn)樣濃度(g／L)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析。(4)采用進(jìn)樣器吸取梔子樣品溶液10¨L，進(jìn)樣，通過保留時間確定梔子苷色譜峰的位置，記錄梔子
4、苷色譜峰面積(保留時間、峰面積)，并計算梔子藥材中梔子苷的含量。結(jié)果實驗結(jié)果實驗結(jié)果實驗結(jié)果梔子藥材中梔子苷的含量測定采用進(jìn)樣器吸取梔子樣品溶液10“L，進(jìn)樣，記錄梔子苷色譜峰面積(保留時間、峰面積)，并計算梔子藥材中梔子苷的含量。實驗結(jié)果表明，梔子藥材中梔子苷的含量為3．01％采用HPLC內(nèi)標(biāo)法測定待測溶液中撲熱息 痛和阿司匹林的含量儀器與試劑Aglientl100seriesHPLC(VWD檢測器、四元恒流泵、在線脫氣機(jī)、手動進(jìn)樣器)，美國安捷倫公司；SB3200超聲波清洗器，寧波新芝生物科技公司。撲熱息痛(CP，含量>98％)，國
5、藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；阿司匹林(CP，含量>98％)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；咖啡因(CP，含量>98％)，ALFAAESAR，AJOHNSONMATTHEYCOMPANY；甲醇、乙腈為色譜純，Merck公司。實驗步驟配制溶液(1)流動相的配制。乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)，減壓過濾并超聲波脫氣。(2)對照品溶液的配制。分別稱取40mg撲熱息痛和50mg阿司匹林，精密稱定質(zhì)量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解，甲醇定容，即得4．0g／L的撲熱息痛、5．0g／L的阿司匹林的混合對照品溶液A。稱取50mg的咖啡因，精
6、密稱定質(zhì)量，于10mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解，甲醇定容，即得5．0g／L的咖啡因內(nèi)標(biāo)溶液B。分別精密移取0．1，0．5，1．0，2．5，5．0mL的混合對照品溶液A和1．0mL的咖啡因內(nèi)標(biāo)溶液B于25．0mL容量瓶中，溶解，混勻，以甲醇定容，即得濃度分別為0．016，0．08，0．16，0．4，0．8g／L撲熱息痛和0．02，0．10，0．20，0．50，1．0g／L阿司匹林、內(nèi)標(biāo)物咖啡因濃度為0．2g／L的5種混合對照品溶液。(3)供試品溶液的配制。精密移取待測樣品溶液5mL和1．0mL的B于25mL的容量瓶中，溶解，混勻，以甲
7、醇定容，并平行處理3份。測定(1)安裝C18。反相柱，按儀器操作說明依次打開色譜儀各單元的電源。(2)色譜條件：C18一ODS色譜柱(5um，4．6mm×250mm)；流動相比例：乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)；流動相流速：1．0mL／min；檢測波長：273nm。(3)換上流動相，待基線穩(wěn)定后，采用進(jìn)樣器依次吸取濃度分別為0．016、0．08、0．16、0．4、0．8g／L撲熱息痛和0．02、0．10、0．20、0．50、1．0g／L阿司匹林、內(nèi)標(biāo)物咖啡因濃度為0．2g／L的5種混合對照品溶液各10uL進(jìn)樣，待組分色譜峰出
8、完后，按“停止”鍵停止分析。記錄各色譜峰面積(保留時間、峰面積)，以對照品峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)(y)，以濃度為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析，求撲熱息痛和阿司匹林的線性方程。(4)采用
