格氏堿中甜菜堿的測定方法 (1)

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1、格氏堿中甜菜堿的測定方法??1、?原理　　凱氏法測定試樣中的含氮量，即在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)8.396，計算出甜菜堿含量。??2、試劑??2.1?硫酸（GB?625）：化學(xué)純，含量為98％，無氮。????2.2?混合催化劑：0.4g硫酸銅，5個結(jié)晶水（GB?665），6g硫酸鉀（HG?3—920）或硫酸鈉（HG?3—908），均為化學(xué)純，磨碎混勻。????2.3?氫氧化鈉（GB?629）：化學(xué)純，40％水溶液（m/V）。???2.4?硼酸（GB?628）：

2、化學(xué)純，2％水溶液（m/V）。???2.5?混合指示劑：甲基紅（HG?3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚綠（HG?3—1220）0.5％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。???2.6?鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定，按GB?601制備。??2.6.1?鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL鹽酸（GB?622，分析純），注入?1?000mL蒸餾水中。????2.6.2?鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL鹽酸（GB?622，分析純），注入1?000mL蒸餾水中。????2.7?蔗糖（HG?3—1001）：分

3、析純。????2.8?硫酸銨（GB?1396）：分析純，干燥。????2.9?硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1?000mL，加入0.1％溴甲酚綠乙醇溶液10mL，0.1％甲基紅乙醇溶液7mL，4％氫氧化鈉水溶液0.5mL，混合，置陰涼處保存期為一個月（全自動程序用）。???3、?儀器設(shè)備???3.1?實驗室用樣品粉碎機或研缽。????3.2?分樣篩：孔徑0.45mm（40目）。???3.3?分析天平：感量0.0001g。????3.4?消煮爐或電爐。????3.5?滴定管：酸式，10、25mL。??3.6?凱氏燒瓶：250mL。???3.7?凱氏蒸餾裝置：半微量水蒸氣蒸餾式

4、。????3.8?錐形瓶：150、250mL。???3.9?容量瓶：100mL。????3.10?消煮管：250mL。??3.11?定氮儀：以凱氏原理制造的各類型半自動。??4、?試樣的選取和制備　　選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化。???5?分析步驟???5.1.1?試樣的消煮　　稱取試樣0.5～1g（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，將?凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火

5、力?（360～410℃）直至呈透明的藍綠色，然后再繼續(xù)加熱1~2h。????5.1.2?氨的蒸餾：　將試樣消煮液冷卻，加入20mL蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試樣分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶內(nèi)。蒸汽發(fā)生器?的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10～20mL注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防

6、止漏氣。蒸餾4min降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾?！???5.1.2.3?蒸餾步驟的檢驗　　精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按5.1.2步驟進行操作，測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2％，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。?????5.1.3?滴定　　用5.1.2.1或5.1.2.2法蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（4.6.2）鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。???6?、空白測定　　稱取蔗糖0.5g，代替試樣，按第5章進行空白測定，消耗0

7、.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.2mL。消耗0.02mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積不得超過0.3mL。???7、?分析結(jié)果的表述????7.1?計算見下式：????粗蛋白質(zhì)（％）=（V2-V1）·c×0.0140×8.396/（m×V＇/V）?×100?????式中：V2──?滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；?????V1──?滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)酸溶液體積，mL；?????c──?鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；?????m──?試樣質(zhì)量，g；?????V──?試樣分解液總體積，mL；?????V──?試樣分解液蒸餾用體積，mL