牛心樸子草中有效成分的純化與表征

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1、牛心樸子草中有效成分的純化與表征牛心樸子草CynanchumkomaroviiAl．Iljinski是我國西北旱沙地帶廣泛分布的草本植物［1］。研究發(fā)現(xiàn)，牛心樸子提取物有抗炎、抗菌、抗腫瘤及鎮(zhèn)痛等作用，具有較強的生物活性［2,3］。尤其是其總堿中的7-脫甲氧基娃兒藤堿對煙草花葉病毒(TMV)有很強的抑制作用，超過了當今公認的抗植物病毒抑制劑。牛心樸子草作為植物農(nóng)藥屬于生物類天然型抗植物病毒抑制劑，還有促進植物生長的復(fù)合作用［4］，但由于其活性成分難于提取和分離。因此，很難將其提取工藝應(yīng)用于生產(chǎn)。為了探索工業(yè)化提取

2、牛心樸子草中活性成分的工藝路線，本課題組研究了采用大孔吸附樹脂吸附和分離牛心樸子草提取液中生物堿的方法和條件［5］。本文利用所選用的AB-8大孔吸附樹脂對牛心樸子草提取液中活性成分進行了提取和分離，同時，對其活性部分利用柱層析、重結(jié)晶等方法進行了進一步的分離和純化，并對分離得到的化合物進行了分離鑒定，鑒定結(jié)果為對煙草花葉病毒(TMV)有強抑制作用的活性成分7-脫甲氧基娃兒藤堿。1器材1.1原料及試劑牛心樸子草采自內(nèi)蒙古鄂爾多斯市杭錦旗，曬干粉碎后備用；大孔吸附樹脂AB-8為南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)；石油醚、氯仿、乙醇等

3、為市售分析純。1.2儀器SHZ-D型循環(huán)水式真空泵（河南鞏義市英峪豫華儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52A型，上海亞榮生化儀器廠）；手提式紫外分析儀（ZF5-上?？等A生化儀器制造廠）；質(zhì)譜儀(PloarisQMS型，美國Finnigan質(zhì)譜公司)；紫外-可見光譜儀(UV-3101型，日本Shimadzu(島津)公司)；紅外光譜儀(美國NicoletFT-IR紅外光譜儀)。2方法2.1大孔吸附樹脂柱層析樣品的制備用酸性乙醇溶液浸泡切碎的牛心樸子草地上部分，浸泡兩天后，分離草渣和浸取液，收集浸取液，草渣再進行2次浸泡。

4、浸泡兩天后，再分離草渣和浸取液，草渣棄之，合并兩次浸取液，減壓蒸餾回收溶劑后，得黑色粘稠膏狀物。將黑色粘稠膏加入適量酸水溶解，控制pH=2左右。靜置，過濾，得濾液。黑色粘稠膏再加入酸水溶解，靜置，過濾，得濾液。反復(fù)幾次，以便能夠充分溶出粘稠膏中的生物堿。合并濾液即為生物堿鹽水溶液。2.2牛心樸子草中的活性成分在大孔吸附樹脂柱上的分離將制備的生物堿鹽水溶液加入大孔吸附樹脂層析柱內(nèi)，通過旋塞控制流速為2ml/min，使生物堿鹽在大孔吸附樹脂上進行充分吸附。用碘化鉍鉀試劑對吸附后的流出液進行沉淀試驗，如果有桔紅色沉淀生

5、成，則停止加入生物堿鹽水溶液。待層析柱上部不再存有生物堿鹽水溶液時，加入70%的乙醇水溶液進行解吸，收集解吸液。用碘化鉍鉀試劑對解吸液進行檢測，如果無桔紅色沉淀生成，則停止加入70%的乙醇水溶液。向?qū)游鲋鶅?nèi)加入蒸餾水進行清洗，直至洗出液無乙醇氣味。合并解吸液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收其中的乙醇得生物堿鹽水溶液。滴加氨水調(diào)節(jié)生物堿鹽水溶液的pH=8～9，使生物堿游離出來。加入氯仿進行萃取，直至生物堿溶液滴加碘化鉍鉀試劑無桔紅色沉淀生成則停止萃取。合并氯仿液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收部分氯仿得生物堿濃縮液，生物堿濃縮液進行硅膠柱層析

6、。用石油醚進行洗脫，洗脫部分回收溶劑后進行重結(jié)晶得黃色針狀晶體化合物。圖1化合物的紅外光譜圖3.2紫外光譜解析晶體的紫外光譜圖見圖2。晶體的紫外光譜與稠環(huán)化合物菲的紫外光譜相似。稠環(huán)化合物菲的紫外光譜的三個吸收帶分別為252，295，330nm。晶體由于菲環(huán)上甲氧基的取代和氮原子的取代，因此，晶體吸收波長發(fā)生紅移。晶體在甲醇溶劑中的紫外吸收數(shù)據(jù)為：258，286，311，343，360nm。晶體的波長數(shù)據(jù)與文獻值一致。表1化合物的紅外光譜吸收峰3.3質(zhì)譜解析晶體的質(zhì)譜圖見圖3。從EI-MS圖譜得其分子離子峰為36

7、3(M+)，質(zhì)荷比m/z363，基峰為m/z294；由EI-MS分子離子峰363表明，該晶體化合物含有奇數(shù)個氮。EI-MS圖譜中晶體化合物的質(zhì)荷比m/z363與碎片峰質(zhì)荷比m/z294相差69個單位，說明化合物能夠失去吡咯環(huán)，這是由于化合物進行RDA裂解的結(jié)果；EI-MS譜中主要碎片峰為：m/z294，m/z279，m/z251,m/z263。晶體化合物的裂解方式見圖4。圖3化合物的質(zhì)譜圖圖4化合物的質(zhì)譜裂解方式及主要碎片綜上所述，由紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜都與文獻［6］化合物7-脫甲氧基娃兒藤堿的相關(guān)數(shù)據(jù)一致。

8、晶體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：4結(jié)論以牛心樸子草為原料，對AB-8大孔吸附樹脂處理的牛心樸子草提取液中活性成分進行了提取和分離。對分離得到的化合物采用質(zhì)譜、紅外光譜和紫外光譜進行了表征，經(jīng)鑒定該成分為牛心樸子草中最具有生物活性的化學(xué)成分7-脫甲氧基娃兒藤堿。【參考文獻】［1］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會．中國植物志［M］.北京：北京科學(xué)出版社，1997：240.［2］姚宇澄