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《人胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞體外向類肝細胞誘導(dǎo)分化條件的優(yōu)化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、人胎兒骨髓間充質(zhì)干細胞體外向類肝細胞誘導(dǎo)分化條件的優(yōu)化【關(guān)鍵詞】,骨髓間充質(zhì)干細胞 【Abstract】AIM:Toestablishandoptimizetheinductionanddifferentiationconditionforhumanfetalmarroesenchymalstemcell(MMSCs)differentiationintohepatocytelikecells,observethedifferentiationprocedureandidentifythephenotypesofMM
2、SCs.METHODS:MMSCs,isolatedfromfetalmarroarkerssuchasALBandCK18easuredmunohistochemistry.RESULTS:Cellsincontrolgroupkeptthelongspindleshape,allsize,proliferatedquickly,submittedtypicalfibroblastboyancygroountofgranulesincreased,andthereon.Cellsatrixkeptlongspindl
3、eshapegroatrixchangedfromlongtoroundinshapeandshapeagentreduced.AZApretreatmentinhibitedthecellhyperplasia,andcellchangedfromlongtoshortinshape.PDGFBBpretreatmenthadnoinhibitiontocellproliferation,andcellsbranchedeasily.Immunohistochemicalstaininginalltheinducti
4、ongroupsshoculturecondition,highratiohepatocytelikecellsininducedMMSCscanbeobtainedbytheconditionofinductiongroup4:inatrix,MMSCsarepretreatedmol/LAZAfor10-12h,andHGF10μg/L＋FGF410μg/L,usedaspromoters,areaddedintoHGMmedium. 【Keyarroesenchymalstemcells;hepatocytel
5、ikecells;celldifferentiation;induction 【摘要】目的：建立和優(yōu)化骨髓間充質(zhì)干細胞(marroesenchymalstemcells,MMSCs)向類肝細胞誘導(dǎo)分化的條件及分化過程觀察、鑒定.方法：采用體外分離培養(yǎng)的MMSCs為研究對象，設(shè)計不同的誘導(dǎo)分化條件進行體外誘導(dǎo)，觀察細胞誘導(dǎo)分化過程中形態(tài)結(jié)構(gòu)變化及細胞生物學(xué)特性，應(yīng)用免疫組化檢測肝細胞標志ALB和CK18的表達，建立人胎兒MMSCs向類肝細胞分化的優(yōu)化條件.結(jié)果：未進行誘導(dǎo)的對照組細胞保持長梭型，形狀因子4.5±1.0，
6、面積較小，增生較快，呈典型成纖維細胞的漩渦狀或火焰狀生長，培養(yǎng)后期可見5~7個分支，無細胞變圓，雙核細胞率小于0.1%，逐漸老化，顆粒增多.組化染色未見表達ALB和CK18.所有誘導(dǎo)組細胞在培養(yǎng)中細胞分支均減少，多為1~3個分支，未用基質(zhì)的細胞仍保持長梭形生長，給予基質(zhì)的誘導(dǎo)細胞部分形態(tài)由長變圓，形狀因子下降，給予5氮胞苷（5azacitidine,AZA）預(yù)處理可抑制細胞過度增生，細胞形態(tài)由長梭型逐漸變短，PDGFBB預(yù)處理對細胞增生無明顯抑制作用，細胞容易出現(xiàn)分支.誘導(dǎo)各組組化染色顯示，第21日時均有ALB和CK1
7、8陽性表達.誘導(dǎo)2組～誘導(dǎo)5組的細胞轉(zhuǎn)圓率、雙核細胞比率及ALB，CK18陽性細胞比例均顯著高于對照組及誘導(dǎo)1組(P<0.05).結(jié)論：在無血清培養(yǎng)條件下，按誘導(dǎo)4組的方案10g/LMatrigel作基質(zhì)，2.5mmol/LAZA預(yù)處理10～12h，HGF10μg/L＋FGF410μg/L+HGM培養(yǎng)基可獲得高比例的類肝細胞. 【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細胞；類肝細胞；細胞分化；誘導(dǎo) 0引言 骨髓間充質(zhì)干細胞(MMSCs)是能分化為不同細胞和組織類型的多潛能細胞，是細胞移植的理想.最近研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)移植骨髓細胞可
8、發(fā)育為肝細胞［1-5］.因此，骨髓細胞有治療急慢性肝功能衰竭的潛能.我們采用體外培養(yǎng)的人胎兒MMSCs為研究對象，設(shè)計不同的誘導(dǎo)分化條件進行體外誘導(dǎo)，觀察細胞誘導(dǎo)分化過程中形態(tài)結(jié)構(gòu)變化及細胞生物學(xué)特性，應(yīng)用免疫組化檢測肝細胞標志的表達，以建立人胎兒MMSCs向類肝細胞誘導(dǎo)分化的優(yōu)化條件. 1材料和方法 1.1材料 采用體外細
