高效液相色譜法測定巴豆中巴豆苷的含量

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1、高效液相色譜法測定巴豆中巴豆苷的含量：凌云,趙紅玉,潘興亮,周春祥【摘要】目的：建立用高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）測定巴豆中巴豆苷含量的方法。方法：采用反相HPLC，色譜柱為漢邦HederaODS2（4.6mm×250mm，5μm），流動相為乙腈甲醇水（1︰4︰95），流速為1mL/min，檢測波長292nm，柱溫25℃，進樣量10μL。結(jié)果：該方法的線性范圍為0.161～0.967mg，r=0.9998(n=6)；平均回收率為98.78%，峰面

2、積相對標準差為0.02%。結(jié)論：該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于巴豆藥材中巴豆苷的定量測定?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法;巴豆;巴豆苷　　Methods:Thedeterminationanceliquidchromatographyn(4.6mm×250mm,5μm).ElutionployedobilephaseofacetonitrilemethanolL/min.Thedetectionandthecolumntemperaturee0.161to0.967mg.Thecorrelationcoefficient

3、ofthecalibrationcurvesethodissimple,accurate,andrepeatable,anditissuitableforqualitycontrolofSemenCrotonisTiglii.　　Keyanceliquidchromatography;SemenCrotonisTiglii;isoguanosine　　巴豆為大戟科植物巴豆CrotontigliunL.的干燥成熟果實，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品。其性熱味辛，有大毒，歸胃、大腸經(jīng)，瀉下作用猛烈，外用于惡瘡疥癬，疣痣［1］。

4、現(xiàn)代藥理研究表明巴豆主要具有致炎、致瀉［2，3］，促腫瘤發(fā)生［4］，降低機體免疫功能［5］及抗腫瘤作用［68］。既往對其化學成分的研究主要集中于對巴豆油的分析，如有報道用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀采用面積歸一化法確定巴豆和巴豆霜中揮發(fā)性成分的相對百分含量［9］。2005年版《中國藥典》中僅有巴豆油含量測定［1］，未曾收載有關(guān)巴豆的毒性成分如巴豆毒素、巴豆苷、牽牛子苷的含量標準和使用限量等方面的內(nèi)容，而作為一味臨床較為常用的有毒中藥，使用稍有不慎，極易引發(fā)中毒事件，不利于臨床安全用藥。同時，由于其質(zhì)量控制標準的欠缺，使得醫(yī)務(wù)工投

5、鼠忌器，限制了巴豆藥材在臨床上的應(yīng)用。由于巴豆中的毒性成分在某些病理狀態(tài)下也是其發(fā)揮療效的有效成分，因而更有必要對其展開研究。雖有文獻報道巴豆苷、巴豆毒素的提取及藥理活性研究［10，11］，但至今尚未有測定這些成分的方法報道。本研究采用高效液相色譜法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）對10批次不同產(chǎn)地的巴豆中巴豆苷含量進行測定，從而為有效地控制巴豆藥材質(zhì)量提供依據(jù)?！　?材料與方法　　1.1儀器與試劑Agilent1100液相色譜儀［包括四元梯度泵、自動進樣器、恒溫柱溫箱

6、、二極管陣列檢測器（diodearraydetector，DAD）和AgilentChemstation色譜工作站］，美國Agilent公司生產(chǎn)；AG285電子天平，瑞士Mettler公司生產(chǎn)；KQ500E型超聲波清洗器，江蘇昆山超聲儀器有限公司生產(chǎn)。乙腈、甲醇為色譜純，實驗用水為三蒸水?！　“投顾幉?80815批次和080816、080817批次產(chǎn)地分別為廣西、四川，購于浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片廠；080301批次購于河北安國市神禾中藥材飲片有限責任公司，產(chǎn)地為四川；20081145、20081028和20080906批

7、次購于云南向輝生物科技有限公司，產(chǎn)地皆為云南；081206、090205、090210批次購于山東魯安中藥飲片有限公司，產(chǎn)地分別為四川、云南、甘肅。以上藥材均由南京中醫(yī)藥大學生藥學教研室吳德康教授鑒定為大戟科植物巴豆CrotontigliunL.的干燥成熟果實。巴豆苷對照品（成都普思生物科技有限公司，批號為090302）用HPLC面積歸一化法測定其純度≥98.5%?！　?.2實驗方法　　1.2.1色譜條件漢邦HederaODS2色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈甲醇水(1︰4︰95)，流速為1mL

8、/min，檢測波長292nm，柱溫25℃，進樣量10μL。　　1.2.2系統(tǒng)適應(yīng)性實驗十八烷基硅烷鍵合硅膠（octadecylsilanechemicallybondedsilica，ODS）為填充劑，理論塔板數(shù)按巴豆苷峰面積計算應(yīng)不低于5000，巴豆苷與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，色譜峰拖尾因子在