高效液相色譜測定七味紅花殊勝丸中沒食子酸的含量

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1、高效液相色譜測定七味紅花殊勝丸中沒食子酸的含量【摘要】目的建立測定七味紅花殊勝丸中沒食子酸含量的方法。方法采用kromasil-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱；流動相為甲醇∶水(含0.04%磷酸)=5∶95；檢測波長為274cm；流速1ml·min-1；柱溫35℃。結(jié)果沒食子酸在0.0103～0.206μg之間呈良好的線性關(guān)系。平均回收率為100.32%，RSD=1.88%（n=6），r=0.9998。結(jié)論該法簡便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。【關(guān)鍵詞】高效相液相色譜七味紅花殊勝丸沒食子酸七味紅花殊勝丸是常用藏藥，為黃褐色水丸，氣

2、微香，味苦。主要成分為紅花、天竺黃、獐牙菜、訶子、麻黃、木香、馬兜鈴、五脈綠絨蒿。功能清熱消炎，保肝退黃,用于新舊肝病、勞傷引起的肝血增盛、肝腫大、鞏膜黃染和食欲不振〔1〕。其中含有大量的沒食子酸。沒食子酸含量測定方法有薄層掃描法〔2，3〕，高效液相色譜法〔4，5〕。為有效控制其質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對七味紅花殊勝丸中沒食子酸的的含量進行了測定，收到滿意的效果。方法簡便可靠，分離度好，結(jié)果穩(wěn)定，為控制該產(chǎn)品質(zhì)量提供了可靠的依據(jù)?！　?儀器與材料　　Agilent1100高效液相色譜儀，配置：手動進樣器，在線脫氣機，高效二元梯度泵，恒溫柱溫箱，DAD檢測器，Ag

3、ilent1100色譜工作站。沒食子酸對照品為中國藥品生物制品檢定所提供；試劑：甲醇為色譜純，水為三重蒸餾水，磷酸等均為分析純。　　七味紅花殊勝丸樣品及陰性對照品由青海晶珠藏藥集團公司提供。　　2方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱采用kromasilC18(250mm×4.6mm,5μm),流動相為甲醇∶水（含磷酸0.04%）=5∶95，流速為1ml/min，檢測波長為274nm，進樣量：10μl；柱溫35℃。對照品和樣品色譜圖見圖1。　　a-供試品b-對照品c-陰性實驗1.沒食子酸　　圖1HPLC圖譜（略）　　2.2對照品溶液的制備精密稱取在60℃減壓干燥至恒重的

4、沒食子酸對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.1mg的溶液，即為對照品溶液?！　?.3供試品溶液的制備將七味紅花殊勝丸粉碎，稱量約2.0g，精密稱定。加入甲醇15ml，超聲提取30min，抽濾，以甲醇洗滌濾渣兩次，1ml/次。濾渣重復(fù)上述操作，所得濾液與前一次濾液合并，濃縮后定容至50ml。過0.45μm濾膜后,即為供試品溶液?！　?.4陰性溶液的制備按處方配比稱取除去訶子藥材的其它藥材，制備陰性實驗樣品，然后按供試品溶液的方法提取，并按上述色譜條件測定。結(jié)果在沒食子酸出峰位置未見其它雜質(zhì)峰的干擾峰（見圖1）。說明按本文的實驗條件測定，缺樣空白無干擾?！　?.5線性關(guān)系

5、的考察精密量取對照品溶液，用甲醇稀釋，配制成一定濃度的對照品標準液系列溶液，每次進樣10μl，測定色譜峰面積的積分值，以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，以進樣量X（μg）為橫坐標，測得沒食子酸的回歸方程為:A=10929X-31.526，相關(guān)系數(shù)r=0.9998。結(jié)果表明沒食子酸在0.0103～0.206μg之間線性關(guān)系良好?！　?.6精密度實驗取同一對照品溶液10μl注入液相色譜儀，重復(fù)進樣6次,根據(jù)測得峰面積峰值計算，RSD為2.53%?！　?.7重復(fù)性實驗按供試品溶液制備方法處理同一批樣品6份，按上述色譜條件進行次測定，結(jié)果重復(fù)性良好，樣品中沒食子酸含量的RSD為1.

6、37%?！　?.8穩(wěn)定性實驗按供試品溶液制備方法處理樣品1份，按上述色譜條件測定6次，每次間隔約4h。結(jié)果20h內(nèi)穩(wěn)定性良好，樣品中沒食子酸含量的RSD為2.55%?！　?.9回收率實驗準確稱取已測知含量的同一批樣品，定量加入沒食子酸對照品適量，按供試品溶液制備方法處理并依法進行測定，結(jié)果測定的平均回收率為103.08%，RSD為1.88%(n=6)。　　表1加樣回收實驗結(jié)果（略）　　2.10樣品的測定精密稱取樣品2.0g，按“2.3”項下方制備供試品溶液,經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)過濾,取續(xù)濾液10μl進樣，進行測定，樣品中沒食子酸含量為2.73mg·g-1，保留

7、時間為9.80min。RSD為1.37%(n=6)?！　?討論　　對沒食子酸對照品溶液在200～400nm范圍內(nèi)進行掃描，測得其在215nm和274nm有最大吸收，比較相同色譜條件下樣品與215nm和274nm波長下的色譜圖，檢測波長為274nm的色譜圖沒食子酸峰可以與其它峰達到良好的基線分離，并且雜質(zhì)干擾少，因此采用274nm為檢測波長?！　悠分泻锌伤獾镊焚|(zhì),加熱提取會水解成沒食子酸，因此，樣品選用超聲提取的方法，操作簡便，結(jié)果準確?！?/p>