高效液相色譜法測(cè)定21味寒水石散中沒食子酸的含量論文

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1、高效液相色譜法測(cè)定21味寒水石散中沒食子酸的含量論文【關(guān)鍵詞】21味寒水石散；,,沒食子酸；,.freel。結(jié)果線性范圍0.0206～0.2472μg，平均回收率為99.1%，RSD=1.3%(n=9)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，提供了21味寒水石散中沒食子酸的質(zhì)量控制方法。關(guān)鍵詞：21味寒水石散；沒食子酸；含量測(cè)定；高效液相色譜法DeterminationofGallicAcidin21ponentHanshuishiPoethodtodeterminethecontentofgallicacidin21pone

2、ntHanshuishiPoinedbyHPLC.TheseparationedonKromasilC18columnobilephaseofmethanol-.ResultsThelinearityofthemethodethodisconvenient,accurate,andcanbeusedforthedeterminationofgallicacidin21ponentHanshuishiPoasilC18（250mm×4.6mm，5μm，大連依利特科學(xué)儀器有限公司）色譜柱；KQ3200超聲波清洗器（

3、昆山市超聲儀器有限公司）；TG328A電光分析天平（上海天平儀器廠）。1.2試藥甲醇（色譜純）；沒食子酸對(duì)照品（由中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所胡鳳祖副研究員提供，經(jīng)歸一化檢測(cè)，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏醫(yī)院）。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇制成20.6μg/ml的對(duì)照品溶液。2.2供試品溶液的制備精密稱取樣品2.0g，精密加入甲醇100ml，稱定重量，超聲提取1h，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，過濾，棄去初濾液，續(xù)濾液過0.45μm濾膜，即得供試品溶液。2.3空

4、白樣品溶液的制備將處方中含沒食子酸的藥材如訶子、余甘子等去除后，按供試品溶液的制備方法制備。2.4色譜條件色譜柱：KromasilC18柱；流動(dòng)相：甲醇水（5∶95）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μl。在此條件下，沒食子酸與其它峰分離效果較好，樣品與對(duì)照品在同一保留時(shí)間有相同的波峰出現(xiàn)，而空白溶液則無相應(yīng)的峰，證明空白樣品不干擾，含量測(cè)定專屬。結(jié)果見圖1~3。2.5線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液1，3，6，10，12，15，18μl進(jìn)行測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，沒

5、食子酸進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，回歸方程為：Y＝9219X+6.051，相關(guān)系數(shù)r＝0.9997。結(jié)果表明，沒食子酸在0.0206～0.2472μg之間呈良好的線性。2.6精密度實(shí)驗(yàn)取對(duì)照品溶液5μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，根據(jù)測(cè)得的峰面積積分值計(jì)算，RSD為1.0％。圖1對(duì)照品HPLC色譜圖(1.沒食子酸)(略)圖2樣品HPLC色譜圖(1.沒食子酸)(略)2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取樣品2.0g，共6份，按2.2所述方法處理，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果重現(xiàn)性良好，樣品中沒食子酸含量的RSD為1.9％。2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)按2

6、.2所述方法處理樣品1份，按上述色譜條件測(cè)定，間隔2h/次，結(jié)果12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。圖3空白樣品HPLC色譜圖(略)2.9回收率實(shí)驗(yàn)取樣品約2.0g（n=9），精密稱定，加入一定量的沒食子酸對(duì)照品。按2.2所述方法處理并依法測(cè)定，計(jì)算回收率結(jié)果。見表1。表1回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)2.10樣品測(cè)定取3批成藥樣品，按2.2所述方法制備成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法以峰面積積分值計(jì)算，求得樣品中沒食子酸的含量（每批樣品測(cè)3次取平均值）分別為0.074％、0.073％和0.073％。3討論3.1檢測(cè)波長(zhǎng)確

7、定對(duì)沒食子酸對(duì)照品溶液在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測(cè)得其在220nm和274nm有最大吸收，比較相同條件下樣品于220nm和274nm波長(zhǎng)下的色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm的色譜圖，分離效果好，且雜質(zhì)干擾少，因此，采用274nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2提取方法確定比較了不同提取方法對(duì)提取率的影響，考慮提取時(shí)間和方法的簡(jiǎn)便性，采用超聲1h提取。3.3流動(dòng)相選擇以甲醇水系統(tǒng)為流動(dòng)相進(jìn)樣色譜分析，經(jīng)試驗(yàn)研究表明，甲醇水比例為5∶95時(shí)，樣品峰不拖尾，分離較好。3.4本法測(cè)定藏藥21味寒水石散中沒食子酸的含量，分離度好

8、，具有簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。可作為21味寒水石散中沒食子酸含量測(cè)定的常規(guī)方法。