抑癌基因pten在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其與upa、mmp

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1、抑癌基因PTEN在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其與uPA、MMP徐京晶　朱潤慶　李銘　趙恒敏【關(guān)鍵詞】卵巢癌；免疫組織化學(xué)；原位分子雜交；　　摘要：為探討抑癌基因PTEN表達(dá)在卵巢癌發(fā)生和演進(jìn)中的作用及其與uPA、MMP2的相互關(guān)系，對8例正常上皮來源的卵巢組織、18例卵巢交界性腫瘤、60例上皮性卵巢癌石蠟切片組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測PTEN蛋白、MMP2蛋白的表達(dá)，分子原位雜交法檢測uPA蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，PTEN在正常卵巢、卵巢交界性腫瘤、上皮性卵巢癌中的陽性表達(dá)率分別為87.50%（7/8）、50.00%（9/18）、23.33%（14/60），PTEN的陽性表達(dá)率在上皮性

2、卵巢癌中低于正常卵巢、卵巢交界性腫瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01,P0.05)；I/II期陽性表達(dá)率37.50%明顯高于III/IV期的13.89%（P0.05）；卵巢內(nèi)膜樣癌PTEN陽性表達(dá)率7.14%，顯著低于漿液樣34.78%或黏液樣囊腺癌44.44%（P0.05）。PTEN表達(dá)與uPA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P0.05），與MMP2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P0.01）。關(guān)鍵詞：卵巢癌；免疫組織化學(xué)；原位分子雜交；　　PTEN腫瘤的發(fā)生與多種癌基因及抑癌基因的異常激活、表達(dá)有關(guān)，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是一多步驟、多因素參與的極其復(fù)雜的過程，涉及腫瘤細(xì)胞的黏附、分離、遷移，基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)的降解，腫瘤新

3、生血管生成的諸多方面。PTEN是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因，在生長因子的細(xì)胞信號(hào)傳遞中起著復(fù)雜而重要的作用，通過抑制細(xì)胞有絲分裂、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、轉(zhuǎn)移和分化等發(fā)揮抑癌基因的作用。尿激酶型纖維蛋白激活系統(tǒng)（uPA）通過水解纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶降解細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)而使腫瘤不斷浸潤和擴(kuò)散。金屬基質(zhì)蛋白酶(MMPs)是降解細(xì)胞外基質(zhì)組分時(shí)最重要的一大分子蛋白。我們應(yīng)用免疫組化、分子原位雜交技術(shù)檢測正常卵巢、卵巢交界性腫瘤和上皮性卵巢癌中PTEN、uPA、MMPs的表達(dá)，探討其在卵巢癌發(fā)生及演進(jìn)中的作用及其在卵巢癌預(yù)后評估中的意義。1材料和方法11標(biāo)本來源研究標(biāo)本

4、86例取自武漢市第八醫(yī)院1999年~2005年病理存檔的石蠟標(biāo)本，所有手術(shù)患者術(shù)前均未接受過放療、化療或激素治療，診斷均經(jīng)常規(guī)病理切片證實(shí)?；颊吣挲g32~65歲，中位年齡48歲。正常上皮來源的卵巢組織8例，卵巢交界性腫瘤18例，上皮性卵巢癌60例（其中漿液性囊腺癌23例，黏液性囊腺癌9例，卵巢內(nèi)膜樣癌28例；高~中分化卵巢癌25例，中~低分化卵巢癌35例；按FIGO分級，I/II期24例，III/IV期36例；卵巢癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例）。12實(shí)驗(yàn)試劑鼠抗人PTEN單克隆抗體、尿激酶型纖溶酶型活化因子即用型原位雜交試劑盒、鼠抗人MMP2單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯

5、色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。13方法石蠟塊標(biāo)本制成4μm厚的切片，免疫組織化學(xué)染色程序按SP試劑盒說明進(jìn)行，PBS代替一抗作陰性對照，已知乳腺癌陽性片作陽性對照。PTEN陽性表達(dá)為淡黃色至棕褐色物質(zhì)，定位于細(xì)胞漿，高倍鏡下每張切片選5個(gè)視野，每個(gè)視野記數(shù)100個(gè)細(xì)胞。(-)：25%;(+)：>25%。MMP2以細(xì)胞出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，MMP2表達(dá)的判定以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率的得分之積進(jìn)行評估。（-）：0；（+）：1~3；（++）：4~6；（+++）：7~9。分子原位雜交按試劑盒說明，以未加入探針的預(yù)雜交液代替探針作為空白對照，已知乳腺癌陽性片作陽性對照。

6、每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)算各實(shí)驗(yàn)陽性細(xì)胞的平均百分?jǐn)?shù)，陽性染色均為細(xì)胞質(zhì)著色呈棕黃色顆粒。根據(jù)著色范圍劃分，（-）：無陽性染色細(xì)胞或著色率5%；（+）：陽性細(xì)胞數(shù)5%~25%；（++）：陽性細(xì)胞數(shù)25%~50%；（+++）：陽性細(xì)胞數(shù)>50%。14統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用CS2000軟件包分析，根據(jù)適用條件以Pearson未校正法或Yates校正法計(jì)算χ2值,或直接用確切概率法計(jì)算P值。PTEN、uPA與MMP2的表達(dá)關(guān)系采用配對四格表的相關(guān)分析Yates校正法。2結(jié)果21PTEN在正常卵巢、卵巢交界性腫瘤、上皮性卵巢癌中的表達(dá)PTEN在正常卵巢、卵巢交界性腫瘤、上

7、皮性卵巢癌中的陽性表達(dá)率分別為87.50%（7/8）、50.00%（9/18）、23.33%（14/60），PTEN的陽性表達(dá)率在上皮性卵巢癌中低于正常卵巢、卵巢交界性腫瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01,P0.05)。22PTEN表達(dá)與卵巢癌臨床病理分期的關(guān)系PTEN表達(dá)與卵巢癌的臨床病理分期呈負(fù)相關(guān)（P0.05），I/II期陽性表達(dá)率高于III/IV期，差異有顯著性。在卵巢癌的組織類型中，卵巢內(nèi)膜樣癌PTEN表達(dá)最低，顯著低于漿液樣或黏液樣囊