大黃、蟄蟲對藥對子宮肌瘤模型大鼠erα、erβ及vegf的影響

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1、陜西中醫(yī)學(xué)院2011屆碩士學(xué)位論文第一章實驗研究材料和方法1實驗材料1.1實驗動物72只體重150～170g清潔級健康雌性SD大鼠，二級動物，于陜西中醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合婦科重點學(xué)科實驗室飼養(yǎng)；SPF級墊料、飼料均由第四軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心提供。1.2實驗藥物大黃蟄蟲對藥：由陜西中醫(yī)學(xué)院金秋門診提供，經(jīng)本院藥劑科鑒定無偽劣品。大黃蟄蟲丸：微丸，3g/袋，由成都永康制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：Z-20044169。桂枝茯苓膠囊：0.31g/粒，由連云港康緣制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，編號：302005251。1.3實驗試劑黃體酮注射液（20mg/ml）：由上海通用藥業(yè)股份有限公

2、司生產(chǎn)苯甲酸雌二醇注射液（1mg/ml）：由上海第九制藥廠生產(chǎn)胡姬花花生油（900ml）：由青島嘉里植物油有限公司生產(chǎn)多聚甲醛（500g）：生產(chǎn)于SCRC國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司兔抗人、大、小鼠ERα多克隆抗體：購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司兔抗人、大、小鼠ERβ多克隆抗體：購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司兔抗人、大、小鼠VEGF抗體：購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司SP-0023免疫組化染色試劑盒：購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司DAB顯色試劑盒：購自武漢博士德生物工程有限公司10%水合氯醛：由西交大醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院提供Na2HPO4·12H2O：由天津市科密歐化學(xué)試

3、劑有限公司提供NaH2PO4·2H20：由西安化學(xué)試劑廠提供Nacl：由天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠提供C6H8O7·H2O：由天津市百世化工有限公司提供C6H5Na3O7·2H2O：由天津市百世化工有限公司提供2大黃、蟄蟲對藥對子宮肌瘤模型大鼠ERα、ERβ及VEGF的影響3%H2O2、4%多聚甲醛、0.01MPBS緩沖液、枸櫞酸緩沖液：自配具體配制方法如下：3%雙氧水（H2O2）配制：30%雙氧水30ml加蒸餾水至300ml。4%多聚甲醛的配制：40g多聚甲醛與0.1mol/LPH7.2～7.41000mlPBS混合后加熱至60℃，攪拌并滴加1NNaOH至清涼為止。

4、0.01MPBS緩沖液（PH7.2～7.4）配制：Na2HPO4·12H2O3g、NaH2PO4·2H2O29g、Nacl80g溶于1000Ml蒸餾水中，用NaOH調(diào)PH至7.2～7.4，充分混勻后加蒸餾水至10000ml。1.01M枸櫞酸緩沖液配制：枸櫞酸鈉3g、枸櫞酸0.4g溶于1000ml蒸餾水中。2.4實驗儀器手提式壓力蒸汽滅菌器：由上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司提供ACS電子計價器：上海友聲衡器有限公司制造架盤藥物天平（HC·TP12A·1）：北京醫(yī)用天平廠制造電子分析天平（SNR-1118062890）：瑞士制造一次性無菌注射器：由江西豐臨醫(yī)用器械有限公司

5、生產(chǎn)電熱恒溫干燥箱：由上海市紅衛(wèi)絨繡廠制造DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：生產(chǎn)于上海一恒科技有限公司AO-800病理切片機：由上海醫(yī)療器械四廠制造XSZ-81光學(xué)顯微鏡：由廣西梧州市光學(xué)儀器廠生成2實驗方法3.1藥劑制備大黃、蟄蟲對藥均經(jīng)生藥學(xué)鑒定，符合中國藥典2005年版規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。將大黃、蟄蟲兩味藥物加水煎煮2次、每次2小時，過濾，藥液混合濃縮至小、中、大劑量組分別含生藥約0.15g/ml、0.29g/ml、0.58g/ml，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2雌、孕激素負(fù)荷法建立大鼠子宮肌瘤模型2.2.1動物分組適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，保持室溫18～28℃，相對濕度

6、50%～75%，自然通風(fēng)光照，后隨機分為7組：A組：正常對照組（10只）B組：模型對照組（12只）3陜西中醫(yī)學(xué)院2011屆碩士學(xué)位論文C組：大黃蟄蟲對藥小劑量組（10只）D組：大黃蟄蟲對藥中劑量組（10只）E組：大黃蟄蟲對藥大劑量組（10只）F組：大黃蟄蟲丸組（10只）G組：桂枝茯苓膠囊組（10只）1.2.2給藥方法A組：每周3次（一、三、五）肌肉注射花生油（高壓滅菌）0.2ml/d，共20周。第11周起灌胃蒸餾水2ml/d，6次/周，連續(xù)10周。B組、C組、D組、E組、F組、G組均每周3次（一、三、五）肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/d,共20周。第14周起每周加

7、用黃體酮肌肉注射一次0.5mg/d,共7周。B組：于第10周末處死兩只進(jìn)行預(yù)實驗。第11周給2ml/d蒸餾水灌胃，6次/周，連續(xù)10周。C組：第11周起予含生藥0.15g/ml的大黃蟄蟲對藥懸液2ml/d灌胃，6次/周，連續(xù)10周。D組：第11周起予含生藥0.29g/ml的大黃蟄蟲對藥懸液2ml/d灌胃，6次/周，連續(xù)10周。E組：第11周起予含生藥0.58g/ml的大黃蟄蟲對藥懸液2ml/d灌胃，6次/周，連續(xù)10周。F組：第11周起予含生藥0.07g/ml的大黃蟄蟲丸懸液2ml/d灌胃，6次/周，連續(xù)10周。G組：第11周起予含生藥0.04g/ml的桂枝茯苓