資源描述：
《大黃、蟲(chóng)對(duì)藥含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)人子宮肌瘤細(xì)胞增殖的影響論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、大黃、蟲(chóng)對(duì)藥含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)人子宮肌瘤細(xì)胞增殖的影響論文【摘要】目的觀察大黃蟲(chóng)對(duì)藥不同劑量含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)人子宮肌瘤細(xì)胞增殖的影響。方法原代培養(yǎng)并建立人子宮平滑肌瘤細(xì)胞系，采用中藥血清藥理學(xué)方法處理細(xì)胞，以MTT比色法檢測(cè)含藥血清作用于子宮肌瘤細(xì)胞12，24，48，72h的光密度值，計(jì)算細(xì)胞存活率。結(jié)果大黃蟲(chóng)對(duì)藥含藥血清可直接抑制子宮肌瘤細(xì)胞增殖。結(jié)論大黃蟲(chóng)對(duì)藥含藥血清可直接抑制子宮肌瘤細(xì)胞增殖，子宮肌瘤細(xì)胞是大黃蟲(chóng)對(duì)藥含藥血清發(fā)揮治療作用的靶細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】大黃;蟲(chóng);子宮肌瘤;細(xì)胞培養(yǎng);含藥血清Abstract：ObjectiveToo
2、bservetheeffectsofdifferentdosagesofmedicatedseraofDahuangandZhechongontheproliferationofhumanleiomyomacellsinvitro.MethodsHumanleiomyomacellspharmacologymethod.TheMTTassaycontainingDahuangandZhechongshoyomacells.ConclusionDahuangandZhechongmedicatedserumhasinhibitoryeffect
3、onproliferationofhysteromyomacells,yomacellsaretargetcells.Keyyoma;Cellculture;Medicatedserum子宮肌瘤(myomaofuterus)又稱子宮平滑肌瘤(leiomyomaofuterus).freelin處理滅活補(bǔ)體后，用0.22μm的微孔濾膜過(guò)濾除菌分裝，置-20℃凍存?zhèn)溆谩?.2藥物及試劑大黃蟲(chóng)對(duì)藥，購(gòu)自陜西中醫(yī)學(xué)院金秋門(mén)診，經(jīng)本院藥劑科鑒定無(wú)偽劣品。藥物加水浸泡常規(guī)煎煮過(guò)濾，水浴蒸發(fā)至大、中、小劑量，每毫升含生藥量分別為0.506g，0.253g，
4、0.126g，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩９鹬蜍吣z囊，連云港康緣制藥有限責(zé)任公司，0.31g/粒。國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)210950005，產(chǎn)品批號(hào)060518。胰蛋白酶、DMEM培養(yǎng)基、新生胎牛血清、抗α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Actin)、MTT、SP免疫組化試劑盒均購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)寶泰克生物試劑有限公司。青霉素、鏈霉素、碳酸氫鈉、二甲基亞砜(DMSO)、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、苯甲酸雌二醇、黃體酮均為第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心309細(xì)胞培養(yǎng)室友情提供。1.3儀器電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝科器研究所，DY-1)，電子天平(上海精科天平，Ja12
5、002)，低溫高速離心機(jī)(Heraeusinstruments，Biofugefresco)，低溫高速臺(tái)式離心機(jī)(Heraeusinstruments，Biofugestratos)，超凈工作臺(tái)(匯龍儀表電子責(zé)任有限公司，SHJ系列)，電熱恒溫水槽(精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，DK-600型)，可調(diào)式封閉電爐(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)，臺(tái)式離心機(jī)(Heraeusinstruments，BIOFUGEPICO)，移液槍(GILSON，200μl、10μl、1000μl)，NAPCO-5410型CO2培養(yǎng)箱、OLYMPUS倒置顯微鏡、MR5000
6、型酶標(biāo)儀。一次性過(guò)濾器、培養(yǎng)瓶、離心管、吸管、加樣槍頭、微量振蕩器均由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心細(xì)胞培養(yǎng)室309實(shí)驗(yàn)室友情提供。2方法2.1子宮肌瘤細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定子宮肌瘤標(biāo)本共60例，40例由陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科手術(shù)提供，20例由西安市第四人民醫(yī)院病理科提供。取自因子宮肌瘤而行子宮全切或肌瘤剔除術(shù)的絕經(jīng)前婦女，年齡36～48歲，平均40歲。肌瘤部位為漿膜下或肌壁間，未曾接受性激素治療。術(shù)前取得患者及家屬同意，標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。子宮離體后立即無(wú)菌切取肌瘤組織約2.0cm×2.0cm大小，用0.01%PBS沖洗后，分別置于盛有10%DMEM+雙抗
7、消毒液的消毒瓶中，1h內(nèi)送進(jìn)實(shí)驗(yàn)室。組織貼塊法2原代培養(yǎng)，約3～4周出現(xiàn)致密的細(xì)胞層時(shí)取出組織塊，使細(xì)胞生長(zhǎng)融合，再用胰酶消化法2傳代培養(yǎng)。7～10d后細(xì)胞生長(zhǎng)成致密層時(shí)可再傳代，傳代細(xì)胞均為梭形細(xì)胞。選生長(zhǎng)良好、形態(tài)均一的第3～5代細(xì)胞，α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Actin)SP免疫組化法鑒定后用于實(shí)驗(yàn)。2.2細(xì)胞鋪板培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組將第3～5代子宮肌瘤細(xì)胞消化，加20%完全DMEM培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×105/L接種于96孔培養(yǎng)板中，100μl/孔，每組設(shè)8個(gè)平行孔，共6組：空白對(duì)照組(無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液)、細(xì)胞對(duì)照組(無(wú)藥血清組，20
8、%正常血清)、陽(yáng)性對(duì)照組(20%桂枝茯苓膠囊含藥血清)，大黃蟲(chóng)對(duì)藥大、中、小劑量組(20%大黃蟲(chóng)對(duì)藥大、中、小劑量含藥血清)。孵育24h細(xì)胞貼壁后，吸棄上清，加入無(wú)
