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《大鼠肝卵圓細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子 》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、大鼠肝卵圓細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子涂玉亮,方馳華,鄒玉華【關(guān)鍵詞】細(xì)胞間黏附分子Expressionandregulationofintercellularadhesionmolecule1inhepaticovalcellsinrats 【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)inhepaticovalcells(HOCs)andtheregulationofnuclearfactorκB(NFκB)intheexpress
2、ionofICAM1.METHODS:eDAB)for4munocytochemistryedtodetecttheexpressionofICAM1.HOCsiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)assayountofICAM1mRNAinHOCsculturedmunocytochemistryindicatedthatICAM1expressionotedinTNFαgroup(P0.01)iquantitativeRTPCRassayindic
3、atedthattheexpressionsofICAM1olecule1；hepaticstemcells；NFkappaB 【摘要】目的:探討細(xì)胞間黏附分子1(ICAM1)在肝卵圓細(xì)胞(HOCs)中的表達(dá),及核因子(NFκB)對(duì)其表達(dá)的調(diào)控作用.方法:0.6g/kg3＇甲基4二甲基胺偶氮苯（3＇methyldimethylaminoazobenzene,DAB）飼喂1mRNA表達(dá)的變化.結(jié)果:HOCsICAM1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)明顯陽(yáng)性.與對(duì)照組比較,體外培養(yǎng)HOCs時(shí)TNFα促進(jìn)HOCs的增殖(P0.01),TGFβ1對(duì)HOCs的增
4、殖能力無(wú)明顯影響；RTPCR半定量分析,與對(duì)照組比較，TNFα組ICAM1mRNA相對(duì)灰度值增高(P0.01),而TGFβ1組ICAM1mRNA相對(duì)灰度值降低(P0.01).結(jié)論:在肝損傷組織中HOCs表達(dá)ICAM1,TNFα和TGFβ1分別通過(guò)對(duì)NFκB活性的促進(jìn)和抑制來(lái)調(diào)控ICAM1的表達(dá). 【關(guān)鍵詞】細(xì)胞間黏附分子1;肝卵圓細(xì)胞；核因子κB 0引言 近年來(lái),肝卵圓細(xì)胞（hepaticstemcells,HOCs）的研究受到重視〔1〕.在大鼠肝損傷和肝癌模型的肝組織中存在HOCs大量增生〔2〕,但哪種細(xì)胞表達(dá)ICAM1還不完全清
5、楚.骨髓造血干細(xì)胞（hemopoieticstemcells,HSCs）表面存在一組以ICAM1為主的黏附分子,能介導(dǎo)HSCs與骨髓基質(zhì)的黏附,從而使HSCs產(chǎn)生一種定向遷移的作用〔3〕.研究表明,HOCs可以來(lái)自于HSCs.既然HOCs可以來(lái)自于HSCs,且HSCs表達(dá)ICAM1,那么HOCs也應(yīng)象HSCs一樣能表達(dá)ICAM1.為此,我們研究HOCs表達(dá)ICAM1的證據(jù)及其調(diào)控. 1材料和方法 1.1材料 1，即用型SABC試劑盒及DAB顯色劑購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程公司設(shè)計(jì)合成,βantinsens
6、eprimer5＇GCATTGTAACCAACTGGGACG3＇,antisenseprimer5＇TTGCCGATAGTGATGACCT3＇,擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為535bp；ICAM1senseprimer,5＇CGTGCTGTATGGTCCTCG3＇,antisenseprimer5＇GGGCTTGTCCCTTGAGTT3＇,擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度422bp；Marker購(gòu)于上海生工生物工程公司；總RNA提取試劑盒、mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq聚合酶購(gòu)于Promega公司；Ⅳ型膠原酶、TNFα,TGFβ1購(gòu)于Sigma公司. 1.2方法 EM基礎(chǔ)培養(yǎng)
7、液稀釋細(xì)胞懸液.高速離心管分裝Percoll梯度離心液,細(xì)胞液鋪于上層,4℃12000g離心30min,吸取700mL/L和500mL/L之間細(xì)胞液,DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液稀釋,4℃1000g離心30min,棄上清液,用150mL/L胎牛血清稀釋細(xì)胞密度至1.0×109/L.取4個(gè)12孔培養(yǎng)板分別標(biāo)記為A，B，C，D4組,每組又分為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ亞組,每亞組4孔,各孔加入上述細(xì)胞懸液0.5mL,然后加適量細(xì)胞培養(yǎng)基,Ⅰ亞組為空白對(duì)照組,Ⅱ亞組和Ⅲ亞組分別加入2.0×105U/L的TNFα和10mg/L的TGFβ1.分別于3，6，9，12d計(jì)數(shù)A，
8、B，C，D組中各1組的細(xì)胞數(shù). 1.2.1ICAM1免疫細(xì)胞化學(xué)上述細(xì)胞液適量滴于防脫片處理的清潔載玻片上,培養(yǎng)8h后細(xì)胞黏附貼壁.具體操作按SABC法試劑盒說(shuō)明進(jìn)行.光鏡下觀察結(jié)果. 1
