大鼠肝卵圓細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子論文

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1、大鼠肝卵圓細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子論文涂玉亮,方馳華,鄒玉華【關(guān)鍵詞】細(xì)胞間黏附分子Expressionandregulationofintercellularadhesionmolecule1inhepaticovalcellsinrats【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)inhepaticovalcells(HOCs)andtheregulationofnuclearfactorκB(NFκ

2、B)intheexpressionofICAM1.METHODS:eDAB)for4munocytochemistryedtodetecttheexpressionofICAM1.HOCsiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)assayountofICAM1mRNAinHOCsculturedmunocytochemistryindicatedthatICAM1expressionotedinTNFαgroup(P0.01)

3、iquantitativeRTPCRassayindicatedthattheexpressionsofICAM1olecule1；hepaticstemcells；NFkappaB【摘要】目的:探討細(xì)胞間黏附分子1(ICAM1)在肝卵圓細(xì)胞(HOCs)中的表達(dá),及核因子(NFκB)對其表達(dá)的調(diào)控作用.方法:0.6g/kg3′甲基4二甲基胺偶氮苯（3′methyldimethylaminoazobenzene,DAB）飼喂1mRNA表達(dá)的變化.結(jié)果:HOCsICAM1免疫細(xì)胞化學(xué)檢測明顯陽性.與對照組比較,體外

4、培養(yǎng)HOCs時TNFα促進(jìn)HOCs的增殖(P0.01),TGFβ1對HOCs的增殖能力無明顯影響；RTPCR半定量分析,與對照組比較，TNFα組ICAM1mRNA相對灰度值增高(P0.01),而TGFβ1組ICAM1mRNA相對灰度值降低(P0.01).結(jié)論:在肝損傷組織中HOCs表達(dá)ICAM1,TNFα和TGFβ1分別通過對NFκB活性的促進(jìn)和抑制來調(diào)控ICAM1的表達(dá).【關(guān)鍵詞】細(xì)胞間黏附分子1;肝卵圓細(xì)胞；核因子κB0引言近年來,肝卵圓細(xì)胞（hepaticstemcells,HOCs）的研究受到重視［1］

5、.在大鼠肝損傷和肝癌模型的肝組織中存在HOCs大量增生［2］,但哪種細(xì)胞表達(dá)ICAM1還不完全清楚.骨髓造血干細(xì)胞（hemopoieticstemcells,HSCs）表面存在一組以ICAM1為主的黏附分子,能介導(dǎo)HSCs與骨髓基質(zhì)的黏附,從而使HSCs產(chǎn)生一種定向遷移的作用［3］.研究表明,HOCs可以來自于HSCs.既然HOCs可以來自于HSCs,且HSCs表達(dá)ICAM1,那么HOCs也應(yīng)象HSCs一樣能表達(dá)ICAM1.為此,我們研究HOCs表達(dá)ICAM1的證據(jù)及其調(diào)控.1材料和方法1.1材料1，即用型SA

6、BC試劑盒及DAB顯色劑購自武漢博士德生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程公司設(shè)計合成,βantinsenseprimer5′GCATTGTAACCAACTGGGACG3′,antisenseprimer5′TTGCCGATAGTGATGACCT3′,擴(kuò)增產(chǎn)物長度為535bp；ICAM1senseprimer,5′CGTGCTGTATGGTCCTCG3′,antisenseprimer5′GGGCTTGTCCCTTGAGTT3′,擴(kuò)增產(chǎn)物長度422bp；Marker購于上海生工生物工程公司；總RNA提取試劑

7、盒、mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq聚合酶購于Promega公司；Ⅳ型膠原酶、TNFα,TGFβ1購于Sigma公司.1.2方法EM基礎(chǔ)培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞懸液.高速離心管分裝Percoll梯度離心液,細(xì)胞液鋪于上層,4℃12000g離心30min,吸取700mL/L和500mL/L之間細(xì)胞液,DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液稀釋,4℃1000g離心30min,棄上清液,用150mL/L胎牛血清稀釋細(xì)胞密度至1.0×109/L.取4個12孔培養(yǎng)板分別標(biāo)記為A，B，C，D4組,每組又分為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ亞組,每亞組4孔,各孔加入上述細(xì)胞懸液0.5

8、mL,然后加適量細(xì)胞培養(yǎng)基,Ⅰ亞組為空白對照組,Ⅱ亞組和Ⅲ亞組分別加入2.0×105U/L的TNFα和10mg/L的TGFβ1.分別于3.freelLEppendorf管中依次加入上述總RNA1μL,10×逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液2μL,AMV逆轉(zhuǎn)錄酶2μL,10mmol/L4×dNTPs2μL,RNA酶抑制劑1μL,ICAM1和βactinantisenseprimer等量1μL,然后加入無R