cxgjic對(duì)大鼠體內(nèi)肝卵圓細(xì)胞的調(diào)控及機(jī)制

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1、優(yōu)秀畢業(yè)論文■r■^掌t掌l*±掌t性·文CX/GJIC對(duì)大—:俸內(nèi)肝舅·田l胞的調(diào)拉a機(jī)●¨HSCHematopoieticstemcells骨髓造血干細(xì)胞IL/DTncisior:IIoading/dyetransfer切開標(biāo)記/染料示蹤技術(shù)LYLuciferYe

2、lOW熒光黃染料LPSLipOpOlysaccharide內(nèi)毒素(脂多糖)MAPKMitogen—activatedproteinkinase分裂原激活的蛋白激酶mRNAMessengerribonucleicacid信使核糖核酸NCNitrocel

3、lulosemembrane硝酸纖維膜NPCsNeuralprogenitorcells神經(jīng)干細(xì)胞0DOpticaldensity光密度PBPhenObarb.taI苯巴比妥PBSPhosphatebuffersaline磷酸鹽緩沖液PHpartialhepatectomy部分肝切除術(shù)PNSPanaxnotoginsengsaponins三七總皂甙RHDRhodamine羅丹明RT.PCRReversetranscription—polymerase逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈chainreaction反應(yīng)SAPKStressa

4、ctivatedproteinkinase應(yīng)激激活的蛋白激酶SerSerine絲氨酸ThrThernonine蘇氨酸第3頁(yè)共117頁(yè)精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文南■夫#t掌’t1嘻女#m{£?^Cx/GJIC對(duì)大量體內(nèi)肝,P硼,-胞的調(diào)控A機(jī),MCX/GJlC對(duì)大鼠體內(nèi)肝卵圓細(xì)胞的調(diào)控及機(jī)制博士生:李學(xué)東導(dǎo)師:傅華群教授摘要研究背景燒傷后肝功能障礙頗為常見,肝功能損害的程度與燒傷嚴(yán)重程度相關(guān)。肝再生是肝損傷后存活肝細(xì)胞增殖修復(fù)重建損傷肝臟的一個(gè)重要病理過程。但是在肝細(xì)胞增殖能力受損時(shí),肝干細(xì)胞成為重建肝臟的主要細(xì)胞

5、來源,肝干細(xì)胞以其高增殖雙向分化潛能,在肝損傷重建過程中展示了誘人的前景。隨著干細(xì)胞研究的興起,人們發(fā)現(xiàn)肝干細(xì)胞與肝臟腫瘤發(fā)生關(guān)系也非常密切,因此對(duì)于肝干細(xì)胞研究的首要任務(wù)是闡明其調(diào)控機(jī)制??p隙連接蛋白(Connexin,CX)介導(dǎo)的縫隙連接細(xì)胞問通訊(gapjunctioninterce]lularcommunication,GJIC)是細(xì)胞問最重要的信息交流形式,調(diào)節(jié)組織的損傷及修復(fù)過程。與生長(zhǎng)、分化密切相關(guān)的小分子物質(zhì)(<1000Da)可以通過GJ從一個(gè)細(xì)胞至另一個(gè)細(xì)胞,從而影響組織細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化和凋

6、亡等重要生物學(xué)過程。最新研究表明干細(xì)胞增殖、分化與cX的表達(dá)密切關(guān)聯(lián),受Cx及其介導(dǎo)的GJlC影響。因此,CX/GAIC可能是干細(xì)胞增殖、分化過程中的關(guān)鍵靶點(diǎn)。卵圓細(xì)胞(hepaticovalcells,HOC)是肝干細(xì)胞的子代細(xì)胞,目前對(duì)肝干細(xì)胞的調(diào)控研究多針對(duì)于HOC,大多探討細(xì)胞因子的影響?,F(xiàn)已證實(shí)IiOC表達(dá)CX43蛋白,但是CX/GJIC對(duì)HOC增殖、分化的調(diào)控作用如何?其機(jī)制如何?目前所知甚少。為探討上述問題,本課題通過建立大鼠IIOC增殖動(dòng)物模型,從以下幾個(gè)層次逐步深入的對(duì)上述問題進(jìn)行研究:第一部分大

7、鼠肝卵圓細(xì)胞增殖模型肝臟的CX/GJIC表達(dá)目的:研究大鼠朋:卵圓細(xì)胞增殖模型肝臟CX/GJIC的表達(dá)規(guī)律。方法:雄1眭Wistar大鼠36只,隨機(jī)分成Control組(n=6)和2AAF/PH組(n-30)。第4頁(yè)菇117頁(yè)精品參考文獻(xiàn)資料優(yōu)秀畢業(yè)論文_■^$E掌院博±掌t《}icx/GJic目^14_內(nèi)*#Ⅷ自m∞q#a“M2-AAF/PH組按改良Solt—Farber法建模:2-kAF每日按20rag/kg劑量灌喂,連續(xù)4天,第5日不灌喂,行2/3肝切除,術(shù)后次日按20mg/kg/d齊lj量繼續(xù)灌喂5日。術(shù)后

8、2一AAF/PH組隨機(jī)在4h、4d、8d、12d、16d/}H應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)取材(n=6),Control組作正常對(duì)照。采用組織病理技術(shù)觀察肝組織的形態(tài)學(xué)變化、免疫組化方法計(jì)數(shù)HOC及CX32、CX43的定位分布,IL/DT技術(shù)分析GJIC,蛋白印跡檢測(cè)Cx43的水平,RT—PCR檢鋇IJCX32、CX43的mRNA表達(dá)。結(jié)果:HOC的增殖特點(diǎn):Control組未見增生反應(yīng)。2-AAF/PH組在肝切后4h無明顯增殖反應(yīng);4d匯管區(qū)有增生反應(yīng),8d至高峰、12d向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)穿插生長(zhǎng)的HOC已連接成片、16d明顯減少,增生細(xì)

9、胞體積較小、細(xì)胞核呈卵圓形、胞質(zhì)較少(為肝細(xì)胞的1/3~1/5)、核/漿比例較大、略嗜堿性、大小及分布不均勻、呈簇狀分布,從匯管區(qū)向肝小葉中央浸潤(rùn),免疫組化顯示增生細(xì)胞對(duì)AFP,CKl9,OV一6,CX43染色陽(yáng)性,具有雙向表型細(xì)胞標(biāo)志特點(diǎn)(肝細(xì)胞表型:AFP,膽管細(xì)胞表型:CKl9),符合HOC的特征。4h~16d增殖HOC數(shù)分別為:2.50±1.20、8

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