資源描述：
《超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠脾細(xì)胞il》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠脾細(xì)胞IL：劉清君，胡敏棣，劉彩梅，鞏婷【摘要】目的觀察超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠脾細(xì)胞白細(xì)胞介素-2(IL-2)和γ-干擾素(IFN-γ)的誘生作用，探討其對(duì)荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法采用超濾膜分離技術(shù)提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯，用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-2和IFN-γ的含量，用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定脾淋巴細(xì)胞IL-2和IFN-γmRNA的表達(dá)水平。結(jié)果超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IF
2、N-γ的含量均較模型組增高，大劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)。各劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2和IFN-γmRNA的表達(dá)水平均增高,中劑量組和大劑量組與模型組比較，均有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯能夠促進(jìn)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子IL-2和IFN-γ的分泌及其mRNA的表達(dá)，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用?！娟P(guān)鍵詞】超濾膜；當(dāng)歸補(bǔ)血湯；白細(xì)胞介素-2；γ-干擾素 ABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheeffectofultra-filt
3、rationextractfromDangguiBuxueDecoction(DBD)onimmunefunctionofH22bearingmouseandexplorethemechanismthroughobservingtheeffectofultra-filtrationextractfromDBDonthesecretionofthecytokines(IL-2,IFN-γ).MethodsI1640為美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品；小牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品；小鼠IL-2、IF
4、N-γELISA試劑盒為北京晶美生物工程有限公司產(chǎn)品；Trizol為美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品；DEPC為博士德生物公司產(chǎn)品；RT-PCR擴(kuò)增試劑盒及Marker為上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品；IL-2、IFN-γ、β-actin引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成(表1)。表1IL-2、IFN-γ、β-actin引物序列（略） 1.3實(shí)驗(yàn)方法 1.3.1動(dòng)物分組及處理 將小鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯大劑量組(10g/kg，相當(dāng)于成人用量的20倍)、
5、中劑量組(5g/kg)、小劑量組(2.5g/kg)，每組各10只。模型對(duì)照組和3個(gè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯組小鼠腋下接種H22肝癌瘤株細(xì)胞懸液(2×107/mL)0.2mL［5］。接種24h后，3個(gè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯組給予等容積(2mL/100g)的相應(yīng)濃度藥液灌胃，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃，每日一次，連續(xù)15d?！ ?.3.2ELISA法測(cè)定荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-2和IFN-γ的含量 常規(guī)制備小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液，加入24孔板中，每孔0.9mL，同時(shí)加入含ConA的1640培養(yǎng)液100μL，置
6、37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36h，收集上清液，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定IL-2和IFN-γ的含量。 PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)設(shè)置為：變性溫度85℃1min；退火溫度55℃1min；延伸溫度72℃2min；共35個(gè)循環(huán)。72℃保溫7min；4℃保存。PCR產(chǎn)物的定量：取RT-PCR產(chǎn)物5μL，20g/L的瓊脂糖凝膠電泳，以β-actin為內(nèi)參同時(shí)擴(kuò)增并電泳。凝膠成像儀記錄圖像并對(duì)凝膠上每一條帶進(jìn)行吸光度掃描定量，結(jié)果用各組的吸光度與β-actin的吸光度之比表示。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。 1.3.4統(tǒng)計(jì)學(xué)
7、處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，多組間比較采用單因素方差分析(One-RNA的表達(dá)的影響 電泳圖顯示，內(nèi)參β-actin的mRNA表達(dá)恒定；超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組IL-2和IFN-γmRNA的條帶亮度均較模型對(duì)照型增強(qiáng)，其中大、中劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2和IFN-γmRNA的條帶亮度明顯增強(qiáng)(圖1)。各標(biāo)本mRNA條帶的吸光度參數(shù)與內(nèi)參基因(β-actin)mRNA條帶的吸光度的比值結(jié)果顯示：超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯各劑量組小鼠脾淋巴細(xì)
8、胞IL-2和IFN-γmRNA的表達(dá)均高于模型對(duì)照組，其中大、中劑量組表達(dá)明顯增高(P<0.05)；模型對(duì)照組小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2和IFN-γmRNA的表達(dá)與正常對(duì)照組比較明顯降低(P<0.05，表3)。表3超濾膜提取當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)荷瘤小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2和IFN-γmRNA表達(dá)的影響（略） 3討論當(dāng)歸補(bǔ)血湯的有效成分為當(dāng)歸多糖及阿魏酸、黃芪異黃酮、黃芪異黃烷、黃芪甲苷、黃芪皂苷等非多糖成分，其有效成分的分子質(zhì)量大多小于5萬(wàn)［6］。本實(shí)驗(yàn)
