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1、松花粉總黃酮對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作【摘要】目的研究松花粉總黃酮對(duì)四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，探討其療效機(jī)制。方法松花粉總黃酮予小鼠連續(xù)灌胃給藥10d，用CCl4造成小鼠急性肝損傷，測(cè)定小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量，以及肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，觀察光鏡下小鼠肝組織的病理變化。結(jié)果松花粉總黃酮高、中、低各劑量組均能抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的急性肝損傷所致的ALT和AST的升高，同時(shí)能升高肝組織中SOD的活性，并能降低MDA的含量;減輕肝組織壞死程度。結(jié)論松花粉
2、總黃酮對(duì)四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與其抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。【關(guān)鍵詞】松花粉總黃酮;急性肝損傷;四氯化碳 松花粉藥名松黃，是松科植物馬尾松Pinusmassoniana，油松P.tabulaeformi或同屬數(shù)種植物于春季花剛開時(shí)，采摘花穗曬干收集，除去雜質(zhì)所得的淡黃色細(xì)花粉，其成分穩(wěn)定、不含激素，是花粉產(chǎn)品中的佼佼者。松花粉是我國傳統(tǒng)食藥兼用的花粉品種，神農(nóng)本草、本草綱目等多種醫(yī)籍中均有記載，有潤心肺、益氣、祛風(fēng)止血、養(yǎng)顏益志、強(qiáng)身健體的功能[1]。作為古老的藥源和營養(yǎng)源，國家衛(wèi)生部近年已確認(rèn)松花粉為新資源食品，并將其
3、列為普通食品管理[2]。松花粉中的多種酶、核酸、有機(jī)酸、黃酮等生物活性物質(zhì)能調(diào)節(jié)人體機(jī)能，具有延緩衰老，促進(jìn)新陳代謝的功能，對(duì)于保健及功能藥物的開發(fā)具有重要意義[3]。 本研究采用CCl4小鼠急性肝損傷模型，運(yùn)用酶活力測(cè)定，抗脂質(zhì)過氧化物測(cè)定以及形態(tài)學(xué)觀察等方法，研究松花粉總黃酮(FlavoneinPinusMassonianapollen，F(xiàn)PMP)對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用并探討其保護(hù)機(jī)制。 1材料 1.1藥物馬尾松花粉采自云南騰沖高黎貢山南麓。將松花粉曬干后冷凍超微粉碎，石油醚回流脫脂，95%乙醇回流浸提，提取后減壓回收乙醇，浸膏加適
4、量水溶解，取水層濃縮后加入已處理好的聚酰胺柱中洗脫，至洗脫液中不含黃酮類成分為止，回收乙醇，水浴上揮干即得松花粉總黃酮，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定黃酮含量為67.80%。松花粉總黃酮用雙蒸水配成所需濃度?！ ?.2試劑聯(lián)苯雙酯滴丸(廣州星群藥業(yè)股份有限公司);四氯化碳(天津市四通化工廠);魯花純正花生油;ALT，AST，MDA，SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)?！ ?.3儀器高速冷凍離心機(jī)(BECKMAN儀器公司J2-HS722);生化分析儀(日本日立公司Hitachi7600-020);分光光度計(jì)(南京第四分析儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海予華儀
5、器有限公司);電熱恒溫水浴箱(杭州中拓儀器有限公司)。 1.4動(dòng)物60只雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，南方醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供?！ ?方法 2.1模型建立[4，5]取昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為6組，即空白對(duì)照組、聯(lián)苯雙酯組、CCl4模型組及松花粉總黃酮高、中、低劑量組。聯(lián)苯雙酯組灌胃給予聯(lián)苯雙酯混懸液150mg·kg-1;松花粉總黃酮3個(gè)劑量組分別灌胃給予松花粉總黃酮15，30，60mg·kg-1?？瞻讓?duì)照組和CCl4模型組給予同等量的蒸餾水。連續(xù)10d后除空白對(duì)照組外其余各組均腹腔注射0.5%CCl4油溶劑0.1ml·10g
6、-1(此即CCl4的給藥方式，為一次性給藥造成急性肝損)。禁食24h后摘眼球取血，靜置30min，3000r·min-1離心10min后分離血清，待測(cè)血清中AST及ALT含量。取肝組織，用生理鹽水洗去殘血并用濾紙濾干，剪成小塊。稱取100mg，加預(yù)冷生理鹽水0.9ml制成10%勻漿，待測(cè)肝組織SOD活性和MDA的含量。取肝大葉相同部位的一小塊肝組織固定于10%福爾馬林，做病理切片檢查?！ ?.2生化檢測(cè)分離得到的各組小鼠血清，按照試劑盒說明測(cè)定ALT和AST的活力。10%肝組織勻漿4℃3500r·min-1離心10min后取上清液，按照試劑盒說明
7、測(cè)定SOD活性和MDA的含量?！ ?.3形態(tài)學(xué)觀察所取小鼠肝組織用10%福爾馬林固定，制備肝組織切片，HE染色，普通光鏡下觀察肝組織病理結(jié)構(gòu)改變?！ ?.4統(tǒng)計(jì)方法組間比較采用CochranCox近似t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)用±s表示，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著?！ ?結(jié)果 3.1對(duì)血清中ALT和AST含量的影響CCl4模型組與空白對(duì)照組比較，血清ALT及AST均明顯增高(P<0.01)。與CCl4模型組比較，松花粉總黃酮高、中、低劑量組均可明顯降低肝損傷小鼠血清ALT及AST活力。表1松花粉總黃酮對(duì)小鼠急性肝損傷血
8、清中ALT，AST活力的影響 3.2對(duì)肝組織中MDA和SOD含量的影響CCl4模型組與空白對(duì)照組比較，肝組織中MDA含量明顯增高，SO
