松花粉總黃酮對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用論文

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1、松花粉總黃酮對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用論文【摘要】目的研究松花粉總黃酮對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的保護作用，探討其療效機制。方法松花粉總黃酮予小鼠連續(xù)灌胃給藥10d，用CCl4造成小鼠急性肝損傷，測定小鼠血清中谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)的含量，以及肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，觀察光鏡下小鼠肝組織的病理變化。結果松花粉總黃酮高、中、低各劑量組均能抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的急性肝損傷所致的ALT和AST的升高，同時能升高肝組織中SOD的活性，并能降低MDA的含量;減輕肝組織壞死程度。結論松花粉總黃酮對四氯化碳所致的小鼠急

2、性肝損傷具有保護作用.freelassoniana，油松P.tabulaeformi或同屬數(shù)種植物于春季花剛開時，采摘花穗曬干收集，除去雜質所得的淡黃色細花粉，其成分穩(wěn)定、不含激素，是花粉產(chǎn)品中的佼佼者。松花粉是我國傳統(tǒng)食藥兼用的花粉品種，神農(nóng)本草、本草綱目等多種醫(yī)籍中均有記載，有潤心肺、益氣、祛風止血、養(yǎng)顏益志、強身健體的功能1。作為古老的藥源和營養(yǎng)源，國家衛(wèi)生部近年已確認松花粉為新資源食品，并將其列為普通食品管理2。松花粉中的多種酶、核酸、有機酸、黃酮等生物活性物質能調節(jié)人體機能，具有延緩衰老，促進新陳代謝的功能，對于保健及功能藥物的開發(fā)具有重要意義3。本研究采用CCl4小鼠

3、急性肝損傷模型，運用酶活力測定，抗脂質過氧化物測定以及形態(tài)學觀察等方法，研究松花粉總黃酮(FlavoneinPinusMassonianapollen，F(xiàn)PMP)對小鼠急性肝損傷的保護作用并探討其保護機制。1材料1.1藥物馬尾松花粉采自云南騰沖高黎貢山南麓。將松花粉曬干后冷凍超微粉碎，石油醚回流脫脂，95%乙醇回流浸提，提取后減壓回收乙醇，浸膏加適量水溶解，取水層濃縮后加入已處理好的聚酰胺柱中洗脫，至洗脫液中不含黃酮類成分為止，回收乙醇，水浴上揮干即得松花粉總黃酮，以蘆丁為標準測定黃酮含量為67.80%。松花粉總黃酮用雙蒸水配成所需濃度。1.2試劑聯(lián)苯雙酯滴丸(廣州星群藥業(yè)股份有

4、限公司);四氯化碳(天津市四通化工廠);魯花純正花生油;ALT，AST，MDA，SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所)。1.3儀器高速冷凍離心機(BECKMAN儀器公司J2-HS722);生化分析儀(日本日立公司Hitachi7600-020);分光光度計(南京第四分析儀器有限公司);旋轉蒸發(fā)儀(上海予華儀器有限公司);電熱恒溫水浴箱(杭州中拓儀器有限公司)。1.4動物60只雄性昆明種小鼠，體質量(20±2)g，南方醫(yī)科大學醫(yī)學動物實驗中心提供。2方法2.1模型建立4，5取昆明種小鼠60只，隨機分為6組，即空白對照組、聯(lián)苯雙酯組、CCl4模型組及松花粉總黃酮高、中、低劑量組。聯(lián)苯

5、雙酯組灌胃給予聯(lián)苯雙酯混懸液150mg·kg-1;松花粉總黃酮3個劑量組分別灌胃給予松花粉總黃酮15，30，60mg·kg-1?？瞻讓φ战M和CCl4模型組給予同等量的蒸餾水。連續(xù)10d后除空白對照組外其余各組均腹腔注射0.5%CCl4油溶劑0.1ml·10g-1(此即CCl4的給藥方式，為一次性給藥造成急性肝損)。禁食24h后摘眼球取血，靜置30min，3000r·min-1離心10min后分離血清，待測血清中AST及ALT含量。取肝組織，用生理鹽水洗去殘血并用濾紙濾干，剪成小塊。稱取100mg，加預冷生理鹽水0.9ml制成10%勻漿，待測肝組織SOD活性和MDA的含量。取肝大葉

6、相同部位的一小塊肝組織固定于10%福爾馬林，做病理切片檢查。2.2生化檢測分離得到的各組小鼠血清，按照試劑盒說明測定ALT和AST的活力。10%肝組織勻漿4℃3500r·min-1離心10min后取上清液，按照試劑盒說明測定SOD活性和MDA的含量。2.3形態(tài)學觀察所取小鼠肝組織用10%福爾馬林固定，制備肝組織切片，HE染色，普通光鏡下觀察肝組織病理結構改變。2.4統(tǒng)計方法組間比較采用CochranCox近似t檢驗，數(shù)據(jù)用±s表示，P0.05為差異顯著，P0.01為差異極顯著。3結果3.1對血清中ALT和AST含量的影響CCl4模型組與空白對照組比較，血清ALT及AST均明顯增高

7、(P0.01)。與CCl4模型組比較，松花粉總黃酮高、中、低劑量組均可明顯降低肝損傷小鼠血清ALT及AST活力。表1松花粉總黃酮對小鼠急性肝損傷血清中ALT，AST活力的影響3.2對肝組織中MDA和SOD含量的影響CCl4模型組與空白對照組比較，肝組織中MDA含量明顯增高，SOD活性明顯降低(P0.01)。與CCl4模型組比較，松花粉總黃酮高、中劑量組均能明顯降低肝損傷小鼠肝組織中MDA含量并能增高SOD的活性。表2松花粉總黃酮對小鼠急性肝損傷肝組織中MDA含量、SOD活性的影響