布氏白僵菌高原優(yōu)良菌株篩選與應用研究

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1、5．3二級液體種子培養(yǎng)基及培養(yǎng)時間篩選目前國內(nèi)一般采用液固兩相法生產(chǎn)布氏白僵菌分生孢子，液體菌種的培養(yǎng)質(zhì)量及培養(yǎng)時間長短關系到整個雙相發(fā)酵過程能否順利進行，能否及時而又保質(zhì)保量地的為生產(chǎn)提供合格產(chǎn)品。本試驗從3組不同的液體培養(yǎng)基配方中篩選出了兩種適合布氏白僵菌Bbr05菌株生長的液體培養(yǎng)基配方。其組成分別為：配方二處理2：10％麩皮浸出液，2％葡萄糖；配方三處理5：5％麩皮浸出液，2％蔗糖，0．4％的黃粉蟲幼蟲組織液，0．05％KH2P04，0．02％MGS04。通過在同種培養(yǎng)基上不同時間產(chǎn)孢量的比較后，得到培養(yǎng)72h是最佳培養(yǎng)時間。在

2、液體種子培養(yǎng)基配方篩選試驗一中，得到處理3的配方是相對較好配方。從培養(yǎng)基成分比較發(fā)現(xiàn)，為液體種子液產(chǎn)孢提供碳源的營養(yǎng)物質(zhì)中，麥麩浸出液>馬鈴薯汁>玉米粉，提供氮源的營養(yǎng)物質(zhì)中，蛋白胨>酵母膏>尿素。配方中提供的其他微量元素及營養(yǎng)物質(zhì)，對布氏白僵菌的產(chǎn)孢作用還需要進一步的研究。根據(jù)液體種子培養(yǎng)基配方篩選試驗一的結(jié)果，對培養(yǎng)基配方進行了優(yōu)化。對麥麩浸出液在培養(yǎng)基中的含量設了兩個不同梯度，加入葡萄糖與蔗糖進行比較，處理3中加大了馬鈴薯汁的含量比例，另外在處理4中加入了動物性蛋白：黃粉蟲蛹粉。試驗結(jié)果顯示：麥麩浸出液中所含有的營養(yǎng)物質(zhì)是布氏白僵

3、菌Bbr05菌株生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，添加麥麩浸出液最適合的濃度介于5％和10％之間，具體數(shù)值有待進一步研究。試驗二雖然增加了配方中馬鈴薯汁的比例，但并未提高菌株的產(chǎn)孢量，表明馬鈴薯汁的營養(yǎng)物質(zhì)不能較好的滿足菌株生長及產(chǎn)孢的需要。另外，布氏白僵菌利用葡萄糖的效率高于利用蔗糖的效率，營養(yǎng)成分復雜的基質(zhì)，更有利于產(chǎn)孢。試驗配方二中，處理1中添加的是蔗糖與蛋白胨，處理4中加入的是葡萄糖與黃粉蟲蛹粉，兩個處理中，提供碳源的蔗糖與葡萄糖、提供氮源的蛋白胨與黃粉蟲蛹粉加入的比例相同。從試驗結(jié)果看，加入蔗糖與蛋白胨基質(zhì)的培養(yǎng)基配方產(chǎn)孢量高于加葡萄糖與

4、黃粉蟲蛹粉的配方，同樣含量的蛋白胨與黃粉蟲蛹粉的含氮量比較，黃粉蟲蛹粉要高于蛋白胨，但試驗得到的產(chǎn)孢量結(jié)果卻顯示出加入蛋白胨比加入黃粉蟲蛹粉產(chǎn)孢量高的結(jié)果。兩個處理的培養(yǎng)基成分中，碳氮比例以及營養(yǎng)物質(zhì)組分均不同，對菌株的產(chǎn)孢量有較大的影響，黃粉蟲蛹粉的含氮量較高或其中的某些物質(zhì)成分是否抑制了菌株的產(chǎn)孢，具體原因還需進一步研究。40樣。另外，白僵菌的致病性受到病菌的?；?、害蟲的敏感性和環(huán)境條件等綜合因素的影響。從不同寄主上分離的白僵菌，對麥蝽(EurygasterintegricepsPuton)進行接種試驗，結(jié)果以椿象菌株接種麥蝽，寄

5、生率為100％，另一種自葉甲分離的白僵菌，接種麥蝽，寄生率為90％，在植物的枯枝落葉下分離的得到的白僵菌接種麥蝽，寄生率只有56％t241。本試驗以篩選出來的布氏白僵菌Bbr05菌株為測試菌株，對原生寄主蠐螬及同翅目、鱗翅目的昆蟲進行殺蟲效果比較試驗。布氏白僵菌具有寄主?；缘奶攸c，因此對原寄主的致病力較強，對大栗鰓金龜蒙古亞種幼蟲表現(xiàn)出很高的侵染率。另外，在對蠐螬的毒力測試中浸漬與拌土兩種施用方法對目標害蟲的致病力有差異，浸漬的效果明顯好于拌土。這一結(jié)果是由于浸漬法已經(jīng)保證了入土的試驗幼蟲體上己經(jīng)黏上了病原菌，同時在濕度上也都具備比較

6、一致的條件；而拌土是先將病原菌混入土中，入土前的金龜幼蟲體是無病原菌的，入土后還有一個病原菌粘附的過程，這一過程受菌液在土中混合是否均勻和土壤濕度是否一致等因素的影響，因而毒力效果必然會有所下降。2008年9月中旬，蒲德強用本試驗培養(yǎng)的布氏白僵菌高孢子含量的液體培養(yǎng)液及固體布氏白僵菌粉對康定川貝母野生撫育基地川貝母地中的金龜子(主要是大栗鰓金龜蒙古亞種)幼蟲進行田間藥效試驗。試驗結(jié)果表明：在200m2的調(diào)查樣地中噴灑孢子濃度為1x108個／ml的布氏白僵菌菌液1500ml，對金龜子的防治效果最好，施藥后金龜子的蟲口密度大幅度降低，有較好

7、的防治效果，試驗還表明：在防治時間上，川I貝母基地5月一8月為雨季，可將防治時間放在這段時間，雨季將更有利于布氏白僵菌的發(fā)育，防治效果應該會更好【761。對其他各目昆蟲的殺蟲效果依次為：同翅目、鱗翅目、鞘翅目。防治效果表現(xiàn)為：甘藍蚜>菜青蟲>松褐天牛幼蟲>黃粉蟲幼蟲。其中以甘藍蚜最為敏感，對黃粉蟲幼蟲的效果最差，最終死亡率不到30％，這可能與該菌株的寄主專化性以及試蟲對菌株的敏感性有關，黃粉蟲幼蟲對布氏白僵菌Bbr05菌株的敏感性較低。在殺蟲譜試驗中，各供試昆蟲寄生死亡的時間也有很大差異，甘藍蚜寄生后死亡時間最短為l天，在侵染3天后出現(xiàn)

8、死亡高峰，菜青蟲侵染4天后死亡率也大幅度提高，侵染一周后，甘藍蚜和菜青蟲均全部感染死亡。蠐螬在侵染15天后，死亡率最高為94．4％。而松褐天牛幼蟲在接蟲感染6天后，黃粉蟲幼蟲在接蟲感染4天后才出現(xiàn)死亡，原因