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1、硫化砷誘導K562細胞凋亡中Bcl┐2和Bax的【關鍵詞】白血病關鍵詞:Bcl-2;砷化物;凋亡;雄黃;白血病，髓樣，慢性摘要:目的研究Bcl-2和Bax在硫化砷誘導的K562細胞凋亡中的表達，探討其在硫化砷誘導的細胞凋亡中的作用.方法K562細胞經一定劑量硫化砷作用特定時間后，MTT法檢測細胞生長、增殖狀態(tài)，光鏡及透射電鏡下觀察細胞形態(tài)及凋亡情況，S-P免疫組化染色檢測Bcl-2、Bax的表達并進行圖像分析.結果硫化砷對K562細胞生長增殖有時間劑量依賴性抑制作用;175～1400μg・L-1硫
2、化砷作用18～144h后，K562細胞出現(xiàn)凋亡細胞的形態(tài)學改變;免疫組化染色表明K562細胞低表達Bcl-2蛋白（A值為0.152±0.023，陰性對照A值0.108±0.012），硫化砷處理后對其表達無明顯影響（A值為0.138±0.028，P>0.05）.硫化砷作用后，Bax蛋白的表達量A值由0.240±0.013增加到0.316±0.021（P<0.01）.結論硫化砷可抑制K562細胞的生長和增殖并誘導其發(fā)生凋亡，其機制可能與Bax蛋白上調有關. Keyia，myeloid，chronic
3、 Abstract:AIMTostudytheexpressionandtheeffectsofBcl-2andBaxproteininapoptosisofK562cellinducedbyar-senicsulfide.METHODSAfterbeingincubatedinculturemediumcontainingvariablelevelsofarsenicsulfide，cellgroorphologybylightandtransmissionelectronmicroscopy.Theexpr
4、ession ofBcl-2andBaxproteininedmuno-histochemicalstainningandimaginganalysis.RESULTSAfterthetreatment，cellgroe-dependentmanner.Morphologically，aftertreatmentefeaturesofapoptosis.ThebaselineBcl-2expressionofK562cellent（A:0.138±0.028）（P>0.05），buttheexpressi
5、onofBaxproteininK562cellsco-culturedaybecorrelateda公司.MTT溶液配制同文獻［8］.鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax均為MaximBiotech，Inc產品，UltraSensitiveTMS-PKit購自福州邁新生物技術開發(fā)公司.K562細胞是一種建株于慢性髓細胞白血病急性變患者骨髓細胞的細胞株［9］，將細胞以2×108・L-1密度接種于含或不含藥物的新鮮RPMI1640完全培養(yǎng)液［內含100mL・L-1小牛血清（杭州四季青產），1
6、00×103U・L-1青霉素，100×103U・L-1鏈霉素］中，在37℃、飽和濕度、含50mL・L-1CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，隔日換液以保證細胞密度在（2～5）×108・L-1. 1.2方法 1.2.1細胞形態(tài)學觀察培養(yǎng)細胞經不同濃度硫化砷溶液作用一定時間后，涂片，分別進行TT法檢測細胞生長增殖狀態(tài)將對數(shù)生長期細胞以2×108・L-1密度接種于96孔板，試驗組加入等體積含各濃度硫化砷的培養(yǎng)液，對照組加入等體積培養(yǎng)液，每組設4個平行孔，并
7、各設空白孔（即只加入藥液和培養(yǎng)液，不加細胞）以調零.分別在培養(yǎng)18，42和70h后，加入MTT20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，離心，棄去上清，加入DMSO150μL，混勻，570nm處測A值.細胞生長抑制率=（1-處理組A值/對照組A值）×100%.重復3次取平均值. 1.2.3免疫組化檢測Bcl-2，Bax表達按照Ultra-SensitiveTMS-PKit說明書操作.細胞滴片經H2O2阻斷過氧化物酶活性后，以非免疫性動物血清封閉，分別與一抗（鼠抗人Bcl-2，兔抗人Bax）室溫下孵育60min，先后與生物素標記
8、的二抗及鏈親和素-過氧化物酶孵育，DAB顯色，蘇木素復染，光鏡下觀察.以上各步驟均在室溫下進行，各步驟間均以pH7.4的PBS充分漂洗，每次染色均設陰性及陽性對照.結果用北航CMIAS真彩色病理圖像分析系統(tǒng)處理，用吸光度平均值（A）代表染色強度. 2結果 2.1細胞的形態(tài)學觀察175～1400μg・L-1硫化砷作用18～144h后，TT實驗發(fā)現(xiàn)，硫化砷對K562細胞生
