超聲波提取連翹葉總黃酮與總酚酸的實(shí)驗(yàn)研究

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1、超聲波提取連翹葉總黃酮與總酚酸的實(shí)驗(yàn)研究田粟唐龍妹許麗琴丁月新劉汝俊馬莉薛鵬【摘要】　　目的確定實(shí)驗(yàn)室超聲波提取連翹葉總黃酮、總酚酸的最佳處理?xiàng)l件。方法采用正交設(shè)計(jì)法對(duì)甲醇濃度（A）、超聲時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）和提取溫度（D）4個(gè)因素進(jìn)行考察，確定最優(yōu)超聲提取條件。結(jié)果因素D和C對(duì)測(cè)定指標(biāo)均有顯著性影響，因素A、B為不顯著因素。結(jié)論以60%甲醇，超聲時(shí)間10min/次，提取3次，提取溫度45℃為最佳超聲提取條件?！娟P(guān)鍵詞】連翹葉；總黃酮；總酚酸；正交實(shí)驗(yàn)；超聲提取　　Abstract：ObjectiveToascertaintheoptimalultrasoni

2、cconditionforextractionoftotalflavonoidsandtotalphenolicacidsfromForsythiasuspenseleavesbyorthogonaldesign.MethodsInthemethodoforthogonaltest,methanolconcentration(60%,70%,and80%),ultrasonictime(10min,15minand20min),extractiontimes(1,2,and3)andextractiontemperature(5℃,25℃,and45℃)peratu

3、reandextractiontimeshadsignificanteffectoneithertotalflavonoidsandtotalphenolicacidscontents,methanolconcentrationandultrasonictimeethanolandthreetimes(10mineachtime)at45℃alconditionforextractionoftotalflavonoidsandtotalphenolicacidsfromForsythiasuspenseleaves.　　Keyg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解定容，搖

4、勻，得濃度為2mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確移取蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30ml分別置于10ml量瓶中，用甲醇補(bǔ)足1ml。加入蒸餾水4ml，混合放置5min后，加5%亞硝酸鈉溶液0.3ml和10%氯化鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6min，加1mol/L氫氧化鈉溶液2ml后,用水定容至10ml,充分混合。510nm處測(cè)定吸光度，以吸光度A（Y）與濃度C（X）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為Y=1.0963X+0.0677，r=0.9999。在0.01～0.06mg/ml線性關(guān)系良好?！　?.1.2樣品溶液測(cè)定精密取適當(dāng)量的以下所

5、得各樣品原液置于10ml量瓶中，用甲醇補(bǔ)足1ml，搖勻，作為供試品溶液。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下操作，測(cè)定總黃酮含量?！　?.2總酚酸含量測(cè)定方法　　2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品18.8mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解定容，搖勻，得濃度為1mmol/L的沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確移取沒(méi)食子酸的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.015，0.030，0.045，0.060，0.075，0.090ml分別置于3ml離心管中，用甲醇補(bǔ)足0.5ml。加入Folin-Ciocalteu試劑1ml，混合放置3min，加7.5%碳酸鈉溶液1ml，搖勻，放置90min，10000r/min離

6、心10min，750nm處測(cè)定吸光度，以吸光度A（Y）與濃度C（X）進(jìn)行直線回歸，得回歸方程為Y=16.229X+0.07，r=0.9999。在1.1×103～6.8×103mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好。　　2.2.2樣品溶液測(cè)定精密取適當(dāng)量的以下各樣品原液置于3ml離心管中，用甲醇補(bǔ)足0.5ml，搖勻，作為供試品溶液。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下操作，測(cè)定總酚酸含量?！　?.3提取溶液的選擇精密稱(chēng)取連翹葉粉末0.50g，18份，置于50ml離心管中，分別加入5ml石油醚進(jìn)行脫色脫脂處理，3000r/min離心，棄去醚液，重復(fù)進(jìn)行兩次后，將濾渣中的石油醚揮發(fā)干燥。分別加10ml沸

7、水、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、正己烷分3次超聲提取，20min/次，3000r/min離心，收集上清液減壓濃縮至干。殘?jiān)眠m量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為樣品原液置于-18℃冰箱保存。稀釋至適當(dāng)濃度后，用于測(cè)定總黃酮、總酚酸含量。結(jié)果見(jiàn)表1?！　”?不同提取溶劑提取總黃酮、總酚酸含量的測(cè)定結(jié)果（略）　　從不同提取溶劑提取總黃酮、總酚酸含量的測(cè)定結(jié)果來(lái)看，甲醇提取物的總黃酮、總酚酸含量最高，說(shuō)明甲醇提取連翹葉多酚成分的效果最好，故本研究選擇甲醇作為提取溶劑。　　2.4超聲提取條件的確定　　2.4.1正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選用L9(34)正交表，