原位肝移植缺血再灌注損傷對大鼠腎臟組織細胞凋亡的影響

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1、原位肝移植缺血再灌注損傷對大鼠腎臟組織細胞凋亡的影響：李波江淼禹化龍劉佳寧高壯雷胡三元【摘要】目的對比研究大鼠原位肝移植缺血再灌注損傷對腎臟組織細胞凋亡的影響。方法參照Kamada“二袖套法”，建立ediaCyberics公司，美國)專業(yè)圖像分析軟件系統(tǒng)進行免疫組織化學定量研究:通過顯微鏡放大400倍攝取圖像，輸入圖像分析系統(tǒng)內(nèi)。每只大鼠取5張切片，每張切片隨機選擇10個視野，10個視野測試面積作為包容空間，將肝細胞Fas表達的陽性面積除以包容空間，取其均值作為陽性區(qū)域面積(陽性面積的百分率)作為表達指數(shù)(positiveexpressi

2、ndex，PEI)?！　?.2.3細胞凋亡檢測采用流式細胞術(shù)(Floetry，F(xiàn)CM)DNA含量分析法檢測缺血再灌注損傷(IRI)后不同時間點腎臟細胞的凋亡率。腎細胞懸液的制備按照操作說明書進行。將制備好的腎細胞混懸液染色后上流式細胞儀檢測。應用CellQuest軟件獲取細胞10000個，以ModFit軟件進行分析,測定細胞凋亡率(AI)，并繪制DNA含量直方圖?！　?.3統(tǒng)計學分析采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)以x±s表示，均數(shù)間比較采用t檢驗?！　?結(jié)果　　2.1術(shù)后生存情況移植術(shù)后24h內(nèi)，兩組大鼠均全部存活(10

3、0%)?！　?.2肝移植術(shù)后肝功及腎功的變化術(shù)后1h肝移植組即可見CREA、BUN顯著升高，術(shù)后3、6、12h其水平逐漸升高，至術(shù)后12h達最高峰，明顯高于對照組(P<0.05)。見表1?！　?.4腎臟細胞AI檢測對照組術(shù)后1h出現(xiàn)細胞凋亡，于術(shù)后12h達最高峰，陽性率約2.94%。肝移植組術(shù)后1h時即出現(xiàn)細胞凋亡，于術(shù)后12h達最高峰，AI為14.46%;隨后凋亡率開始下降，兩組相比差異顯著(P<0.05)。見表2，圖2。表2大鼠肝移植術(shù)后腎臟組織的PEI及AI(x±s，%)　　3討論　　IRI是指組織缺血缺氧達到一定程度和

4、時間后將導致細胞損傷，而當缺血缺氧組織得到血液供應時往往并不使損傷減輕或恢復，反而加速組織細胞死亡。近年來的研究表明細胞凋亡是IRI早期細胞死亡的主要方式〔4〕。　　既往研究中，腎臟的IRI模型是通過阻斷實驗動物的腎動脈造成腎臟缺血，再恢復動脈供血產(chǎn)生的〔5〕。而在大鼠原位肝移植手術(shù)無肝期中，受體腎臟靜脈回流受阻，出現(xiàn)腎臟淤血，而當門靜脈及下腔靜脈吻合完畢再次開放時，腎臟靜脈回流恢復，淤血得以解除，這種形式的IRI稱之為“淤血再灌注損傷”似乎更為準確。由于腎臟靜脈淤血，進而影響動脈血供，同樣產(chǎn)生器官缺血、缺氧等病理改變。此外，考慮受到以下

5、因素的影響：①受體大鼠手術(shù)創(chuàng)傷大(肝移植手術(shù))，②移植肝在術(shù)后一定時間內(nèi)才能正常發(fā)揮作用，③小腸在肝移植術(shù)中同樣遭受“淤血再灌注損傷”的打擊，由于小腸為體內(nèi)最大的細菌庫和淋巴庫，除了會引起局部組織的損傷外，更會由于細菌和毒素的釋放，移位到體循環(huán)而引起網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)發(fā)生系列反應，甚至發(fā)生多系統(tǒng)器官功能不全綜合征。因此，原位肝移植IRI對腎臟的影響機制較為復雜，腎臟的病理損害、細胞凋亡變化規(guī)律等與經(jīng)典的腎臟IRI不一致，具有特殊的變化規(guī)律?！　”緦嶒炛校I臟細胞在術(shù)后1h即出現(xiàn)凋亡，術(shù)后12h達到高峰，然后逐漸下降，它與腎臟功能損害的變化規(guī)律是

6、一致的。因此，原位肝移植IRI造成的腎臟細胞凋亡是導致術(shù)后急性腎衰竭的主要因素，而細胞凋亡可能是腎臟細胞早期死亡的主要形式?！　【C上所述，在原位肝移植中，由于IRI的存在，腎臟也同樣出現(xiàn)細胞凋亡。在肝移植術(shù)中、術(shù)后早期(特別是術(shù)后12h)要注意減輕IRI對腎臟的危害，防止急性腎衰竭的發(fā)生?！緟⒖嘉墨I】　1KamadaN，CalneRY.Orthotopiclivertransplantationintherat:techniqueusingcuffforportalveinanastomosisandbiliarydrainage〔J〕.

7、Transplantation,1979;28(1):4750.　　2KamadaN，CaineRY.AsurgicalexperiencemunToday,1995;16(7):32730.　　4湯禮軍，田伏洲,王雨，等.肝臟低溫保存——再灌注期間肝細胞凋亡及其與Bax基因蛋白相關性的研究〔J〕.中華實驗外科雜志，2001;18(2):1446.　　5KellyKJ，SuttonTA，inocyclineinhibitsapoptosisandinflammationinaratmodelofischemicrenalinjury

8、〔J〕.AmJPhysiolRenalPhysiol，2004;287(4):7606.