hplc法測定廣東土牛膝中腺苷的含量

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1、HPLC法測定廣東土牛膝中腺苷的含量作者：盧綺雯，李堅，蕭鵬，謝艷婷【摘要】目的測定廣東土牛膝中腺苷的含量。方法采用反相高效液相色譜法，色譜柱：DiamonsilTMC18柱，流動相：甲醇磷酸鹽緩沖溶液（體積比12∶88），流速：1.0mL·min-1，檢測波長260nm，柱溫30℃。結(jié)果腺苷的平均回收率為99.5%，RSD值為1.69%;方法精密度試驗RSD值為1.15%(n=6)。結(jié)論該法可用于廣東土牛膝中腺苷的含量測定。【關(guān)鍵詞】廣東土牛膝；腺苷；HPLC；含量測定　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofadenosineinRa

2、dixEupalorriChinenseLinnbyRPHPLC.MethodsSamplesonsilTMC18column（250mm×4.6mm，5μm）usingCH3OHNaH2PO4·Na2HPO4(12∶88)asmobilephase.ThefloL·min-1andthedetection.ResultsThemethodexhibitedgoodlinearityfrom0.0396to0.6336μg.TheaveragerecoveryforadenosineethodcouldbeusedtodetermineadenosinecontentinRadi

3、xEupalorriChinenseLinn.　　KeyL，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得?！　?.1.2對照品溶液　　精密稱取腺苷對照品9.90mg，置50mL量瓶中，加50%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醇適量，振搖使溶解，再加50%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為198μg·mL-1的腺苷對照品貯備液?！　?.2色譜條件及系統(tǒng)用性試驗　　　　色譜柱：DiamonsilTM(鉆石)C18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪馬公司）；流動相：甲醇磷酸鹽緩沖溶液［取0.01mol·L-1磷酸二氫鈉68.

4、5mL與0.01mol·L-1磷酸氫二納31.5mL混合（pH＝6.5）］（體積比12∶88）；流速：1.0mL·min-1，檢測波長：260nm；柱溫：30℃。分別取對照品溶液（腺苷濃度為7.92μg·mL-1），供試品溶液20μL注入色譜儀，按上述色譜條件，記錄色譜圖（圖1,2）。腺苷和樣品中相鄰色譜峰的分離度大于1.5；理論塔板數(shù)以腺苷峰計算不低于3000；保留時間約為17.40min?！　D1腺苷對照品HPLC圖　略　　圖2廣東土牛膝藥材樣品HPLC圖　略　　2.3方法學(xué)考察　　2.3.1線性與范圍　　分別精密吸取一定量的對照品貯備液用50%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醇稀釋成濃度為1.

5、98、3.96、7.92、15.84、23.76、31.68μg·mL-1的對照品溶液，分別取20μL進(jìn)樣測定，以峰面積（A）對對照品質(zhì)量濃度（ρ）進(jìn)行回歸，得回歸方程A=32416.91ρ+1071.34，r=0.9999，試驗表明腺苷在0.0396～0.6336μg之間與峰面積線性關(guān)系良好。　　2.3.2精密度試驗　　取質(zhì)量濃度為7.92μg·mL-1的腺苷對照品溶液20μL，連續(xù)測定5次，記錄峰面積并計算，結(jié)果腺苷峰面積的平均值為256682，RSD為0.72%，表明儀器精密度良好?！　?.3.3穩(wěn)定性試驗　　取土牛膝供試品溶液（批號20051102），在0、2、4、8、12ｈ

6、分別進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，結(jié)果腺苷峰面積的平均值為229720，RSD為1.69%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定?！　?.3.4重復(fù)性試驗　　取同一批號（批號20051102）樣品6份，按“2.1.1”項下方法制備溶液，分別進(jìn)樣測定，結(jié)果腺苷平均含量為0.1406mg·g-1，RSD為1.15%，表明分析方法精密度良好?！　?.3.5加樣回收試驗　　精密稱取已知含量（批號20051102）土牛膝樣品約0.5g，共9份，分別用刻度吸量管精密加入濃度為198μg·mL-1的腺苷對照品溶液0.23、0.23、0.23、0.36、0.36、0.36、0.50、0.50、0.50mL，按“

7、2.1.1”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL進(jìn)行分析，結(jié)果見表1?！　”?腺苷回收率試驗結(jié)果　略　　2.4樣品測定　　取土牛膝樣品3批，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液，分別取7.92μg·mL-1的對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，計算腺苷的含量，結(jié)果見表2?！　”?樣品的測定結(jié)果（略）　　3討論　　3.1提取溶劑的選擇分別用不同體積分?jǐn)?shù)（30%、50%、70%、90%）甲醇混合液進(jìn)行試驗，結(jié)果腺苷的含量分