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《HPLC法測(cè)定冬蟲夏草菌粉及含片中腺苷的含量》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第28卷第2期廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版Vo1．28No．22010年6月JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEditionJun．2010HPLC法測(cè)定冬蟲夏草菌粉及含片中腺苷的含量俞青芬(青海民族大學(xué)化學(xué)系，青海西寧810007)摘要：采用Kromasil—C18(4．6mm×250mm，5m)色譜柱，以0．05mol／L磷酸二氫鉀一甲醇(90：10)為流動(dòng)相，流速為1．0mL·min_。，檢測(cè)波長(zhǎng)260am，柱溫為35。C，建立HPIC法測(cè)定冬蟲夏草菌粉及含片中腺苷的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腺苷含量在0．005~0．2tig(
2、r=0．9993)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為101．19％，RSD=1．45一3)。該方法準(zhǔn)確可靠、結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可有效控制制劑的質(zhì)量。關(guān)鍵詞：冬蟲夏草菌粉；含片；腺苷；HPLC中圖分類號(hào)：0652文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1001—6600(2010)02—0065—04冬蟲夏草ECordycepssinensic(Berk．)Sacc．]為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復(fù)合體，是中國(guó)特有的蟲生真菌，是傳統(tǒng)的名貴藥材，它能補(bǔ)腎壯陽(yáng)、易肺平喘、止血化痰，可用于治療多種疾病，如病后體虛、陽(yáng)痿遺精、腎虛腰疼、健忘、肺虛咳喘等E¨。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究也證實(shí)
3、，蟲草有祛痰平喘、改善腎功能、提高免疫能力、降血脂、調(diào)節(jié)性功能、抗衰老、抗癌[2]等作用。冬蟲夏草的主要成份為腺苷，2000版中國(guó)藥典[4]及文獻(xiàn)E53均采用高效液相色譜法測(cè)定腺苷的含量。但在實(shí)驗(yàn)中采用上述2種方法檢測(cè)，峰形對(duì)稱性不好，嚴(yán)重拖尾且有一干擾峰。反相HPLC色譜法具有快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、精密度高、重復(fù)性好、檢出限低等優(yōu)點(diǎn)，在中藥材及其制劑有效成份分析檢測(cè)方面有一定的應(yīng)用潛力Es-。我們采用RP—HPLCD-lO3分離技術(shù)測(cè)定冬蟲夏草菌粉及含片中腺苷的含量，方法具有快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好及樣品前處理方法簡(jiǎn)單易行、回收率高等優(yōu)點(diǎn)[1，為其質(zhì)量鑒定和制劑質(zhì)量控制提供了理論依據(jù)，并可為含
4、上述藏藥的制劑提供新的定量方法。1儀器與試劑Agilent1100高效液相色譜儀(杭州普惠科技有限公司)，配置手動(dòng)進(jìn)樣器、在線脫氣機(jī)、高壓二元梯度泵、恒溫柱溫箱、DAD檢測(cè)器，Agilent色譜工作站；KQ3200超聲波清洗器。腺苷對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)，水為自制三重蒸餾水，甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。pH6．5的磷酸鹽緩沖液：取0．01mol／L磷酸二氫鈉68．5mL與0．01mol·L磷酸氫二鈉31．5mL，混合，調(diào)pH-6．5。冬蟲夏草菌粉、冬蟲夏草含片由青海月王青藏藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。2試驗(yàn)條件2．1供試品提取溶劑的選擇腺苷在水中溶解度最大，但以水為溶劑較難過
5、濾，且圖譜峰形較難看，后經(jīng)多次試驗(yàn)，采用30％乙醇為溶劑，超聲提取L1。]30min即可基本提取完全。2．2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取腺苷對(duì)照品溶液適量，利用DAD檢測(cè)器在200~400llm掃描其吸收光譜，結(jié)果顯示在260nm處有最大吸收，故選擇260nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。收稿日期：2010—03—08基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30760195)通訊聯(lián)系人：俞青芬(1975一)，女，青海樂都人，青海民族大學(xué)副教授。E—mail：yuqingfen0716@163．corn66廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào)；自然科學(xué)版第28卷2．3流動(dòng)相的選擇我們實(shí)驗(yàn)了磷酸鹽緩沖~(pH6．5)一甲醇(85：15)及不同體
6、積比的0．05mol·L一磷酸二氫鉀一甲醇作流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0．05mol·L磷酸二氫鉀溶液一甲醇(9O：1O)為流動(dòng)相時(shí)，峰形及出峰時(shí)間適宜，為最佳流動(dòng)相。3試驗(yàn)方法與結(jié)果3．1分析溶液的制備3．1．1對(duì)照品溶液制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24h的腺苷對(duì)照品8．0mg，加入30的乙醇溶液溶解，定容稀釋至25mL，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。3．1．2樣品預(yù)處理精密稱取冬蟲夏草含片和菌粉各1g，分別準(zhǔn)確加入3O的乙醇溶液10mL，稱定質(zhì)量，超聲30min，冷卻，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾。按同樣方法連續(xù)超聲3次，將所得濾液置于5OmL容量瓶中稀釋至刻度，搖勻，作為供
7、試品溶液。3．2色譜條件色譜柱~Kromasil—C18(4．6mm×250mm，5m)；流動(dòng)相：0．05tool·L磷酸二氫鉀一甲醇(90l10)；檢測(cè)波長(zhǎng)260nm；流速1．0mL·min_。；柱溫：35。C。3．3分析方法學(xué)考察’3．3．1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各1OL，進(jìn)樣，在3．2色譜條件下測(cè)定腺苷含量(見圖1)。048l248l2I6對(duì)照品樣品圖1對(duì)照品與樣品的HPLC色譜圖Fig．1HPICC
