蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉(zhuǎn)移論文

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1、蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的轉(zhuǎn)移論文張平，賀兼斌，王小華，歐立文【摘要】目的研究蘇拉明聯(lián)合槲皮素對(duì)小鼠肺腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。方法將40只接種高轉(zhuǎn)移性的LA795肺腺癌細(xì)胞T739小鼠隨機(jī)分成5組：對(duì)照組、順鉑（DDP）組、槲皮素組、蘇拉明組、蘇拉明+槲皮素組。實(shí)驗(yàn)3周后，處死全部小鼠，取出雙肺和剝離皮下腫瘤，計(jì)算肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率，計(jì)數(shù)各組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)及算出肺表面結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移抑制率.freelicrovesseldensity，MVD），血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascularendothelialgroinbinationainMiceKeyi

2、n;Quercetin;Angiogenesis;Lungadencarcinoma;Metastasis目前肺癌發(fā)病率和死亡率都有明顯增高趨勢(shì)，腺癌為其一主要組織學(xué)類型，癌瘤內(nèi)血管豐富，局部侵潤(rùn)和血行轉(zhuǎn)移發(fā)生較早。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，也是主要死因。自Folkmam1首先提出實(shí)體瘤生長(zhǎng)需要血管生成理論后，抗血管治療腫瘤轉(zhuǎn)移也成為了當(dāng)前腫瘤生物治療的研究熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)利用LA795肺腺癌細(xì)胞形成高轉(zhuǎn)移T739小鼠皮下腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物復(fù)制模型2，應(yīng)用具有血管生成抑制作用的蘇拉明及槲皮素，以順鉑為對(duì)照，觀察單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)LA795肺腺癌肺轉(zhuǎn)移的抑

3、制作用，并探討其作用機(jī)制。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞株、藥品及試劑T739雄性小鼠40只，鼠齡4～5周，均重20g左右，LA795肺腺癌荷瘤鼠兩只，均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院動(dòng)物室提供（合格證號(hào)SCXK11000005），南華大學(xué)腫瘤研究所提供SPF級(jí)飼養(yǎng)環(huán)境。順鉑購(gòu)于江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，蘇拉明（Suramin）及槲皮素（Quercetin）購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，VEGF兔抗鼠單抗購(gòu)于美國(guó)SantaCruz生物科技公司，CD34免抗鼠一抗、廣譜型SP試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物工程公司。1.2動(dòng)物模型的建立處死兩只荷瘤鼠

4、，剝離瘤塊，研磨成勻漿液，過(guò)360目鋼網(wǎng)，生成腫瘤細(xì)胞懸液，鏡下調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2×106個(gè)/ml，于每只小鼠右后腿根部外側(cè)皮下注射0.2ml瘤液，形成小鼠高轉(zhuǎn)移性動(dòng)物腫瘤模型。1.3分組及用藥小鼠皮下移植處均成瘤，接種4d后隨機(jī)分成5組，每組8只。(1)對(duì)照組:丙二醇0.2ml+生理鹽水0.2ml/只腹腔注射（iq），每天一次；(2)順鉑組:順鉑2mg/(kg·d)溶于生理鹽水0.2ml中iq，于接種后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2ml/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素組:槲皮素50mg/(kg·d)溶于丙二醇0.2ml中iq，每天一次

5、；(4)蘇拉明組:蘇拉明10mg/(kg·d)溶于生理鹽水0.2ml中iq，每天一次；(5)槲皮素+蘇拉明組:槲皮素及蘇拉明按3、4組用藥。1.4方法與觀察指標(biāo)1．4．1藥物對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響腫瘤接種24d處死小鼠，剝離皮下腫瘤，剖胸觀察雙肺表面腫瘤轉(zhuǎn)移情況，計(jì)數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，肺表面結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移抑制率=（1用藥組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)/對(duì)照組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)）×100%,稱肺濕重。肺及皮下腫瘤置入4%的中性甲醛固定，石蠟包埋，組織切片（4μm）行HE染色及免疫組化染色。1．4．2移植瘤內(nèi)VEGF、MVD的表達(dá)采用免疫組化SP法檢測(cè)，方法步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書

6、進(jìn)行（皆1∶100稀釋為工作液），用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。VEGF的判定標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤細(xì)胞漿及胞膜呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，LuzexF圖像分析系統(tǒng)測(cè)定腫瘤組織中VEGF平均灰度值(其灰度值越低，則VEGF表達(dá)水平越高，反之亦然)，將每張切片在40倍鏡下隨機(jī)測(cè)10個(gè)視野，用平均灰度值評(píng)價(jià)染色強(qiáng)度。MVD判斷標(biāo)準(zhǔn)參考VD有一致性，說(shuō)明蘇拉明和槲皮素可抑制腫瘤內(nèi)血管生成，切斷腫瘤營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和腫瘤轉(zhuǎn)移通道，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。我們同時(shí)觀察到蘇拉明與槲皮素聯(lián)合能增強(qiáng)血管抑制作用，可能與槲皮素亦有抑制血管增殖的活性有關(guān)［7］，兩者具有協(xié)同作用。結(jié)合VEGF表達(dá)灰

7、度值和肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.88,P0.01)，提示VEGF是監(jiān)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移的較好指標(biāo)。蘇拉明和槲皮素可通過(guò)下調(diào)這些蛋白質(zhì)表達(dá)而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，說(shuō)明抑制血管生成為蘇拉明和槲皮素抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。綜上所述，蘇拉明和槲皮素對(duì)LA795肺腺癌的肺轉(zhuǎn)移有抑制作用，聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用；它們抑制LA795肺腺癌轉(zhuǎn)移與其抑制腫瘤內(nèi)VEGF表達(dá)相關(guān)，其具體相關(guān)機(jī)制尚需進(jìn)一步探討?！?/p>