資源描述：
《蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉(zhuǎn)移》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的轉(zhuǎn)移作者：張平，賀兼斌，王小華，歐立文【摘要】目的研究蘇拉明聯(lián)合槲皮素對小鼠肺腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。方法將40只接種高轉(zhuǎn)移性的LA795肺腺癌細(xì)胞T739小鼠隨機(jī)分成5組：對照組、順鉑（DDP）組、槲皮素組、蘇拉明組、蘇拉明+槲皮素組。實驗3周后，處死全部小鼠，取出雙肺和剝離皮下腫瘤，計算肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率，計數(shù)各組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)及算出肺表面結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移抑制率，測量各組小鼠肺濕重。免疫組化和圖像分析系統(tǒng)檢測皮下移植瘤中微血管密度（microvesseldensity，MVD）
2、，血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgroinbinationainMiceKeyin;Quercetin;Angiogenesis;Lungadencarcinoma;Metastasis目前肺癌發(fā)病率和死亡率都有明顯增高趨勢，腺癌為其一主要組織學(xué)類型，癌瘤內(nèi)血管豐富，局部侵潤和血行轉(zhuǎn)移發(fā)生較早。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，也是主要死因。自Folkmam[1]首先提出實體瘤生長需要血管生成理論后，抗血管治療腫瘤轉(zhuǎn)移也成為了當(dāng)前腫瘤生物治療的研究熱點之一。本實驗利用LA795肺腺癌細(xì)胞
3、形成高轉(zhuǎn)移T739小鼠皮下腫瘤轉(zhuǎn)移動物復(fù)制模型[2]，應(yīng)用具有血管生成抑制作用的蘇拉明及槲皮素，以順鉑為對照，觀察單獨及聯(lián)合用藥對LA795肺腺癌肺轉(zhuǎn)移的抑制作用，并探討其作用機(jī)制。1材料和方法1.1實驗動物、細(xì)胞株、藥品及試劑T739雄性小鼠40只，鼠齡4～5周，均重20g左右，LA795肺腺癌荷瘤鼠兩只，均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院動物室提供（合格證號SCXK11000005），南華大學(xué)腫瘤研究所提供SPF級飼養(yǎng)環(huán)境。順鉑購于江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，蘇拉明（Suramin）及槲皮素（Querceti
4、n）購于美國Sigma公司，VEGF兔抗鼠單抗購于美國SantaCruz生物科技公司，CD34免抗鼠一抗、廣譜型SP試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物工程公司。1.2動物模型的建立處死兩只荷瘤鼠，剝離瘤塊，研磨成勻漿液，過360目鋼網(wǎng)，生成腫瘤細(xì)胞懸液，鏡下調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2×106個/ml，于每只小鼠右后腿根部外側(cè)皮下注射0.2ml瘤液，形成小鼠高轉(zhuǎn)移性動物腫瘤模型。1.3分組及用藥小鼠皮下移植處均成瘤，接種4d后隨機(jī)分成5組，每組8只。(1)對照組:丙二醇0.2ml+生理鹽水0.2ml/只腹腔注射（i
5、q），每天一次；(2)順鉑組:順鉑2mg/(kg·d)溶于生理鹽水0.2ml中iq，于接種后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2ml/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素組:槲皮素50mg/(kg·d)溶于丙二醇0.2ml中iq，每天一次；(4)蘇拉明組:蘇拉明10mg/(kg·d)溶于生理鹽水0.2ml中iq，每天一次；(5)槲皮素+蘇拉明組:槲皮素及蘇拉明按3、4組用藥。1.4方法與觀察指標(biāo)1．4．1藥物對腫瘤轉(zhuǎn)移的影響腫瘤接種24d處死小鼠，剝離皮下腫瘤，剖胸觀察雙肺表面腫瘤轉(zhuǎn)移情況，計數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移
6、結(jié)節(jié)數(shù)，肺表面結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移抑制率=（1用藥組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)/對照組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)）×100%,稱肺濕重。肺及皮下腫瘤置入4%的中性甲醛固定，石蠟包埋，組織切片（4μm）行HE染色及免疫組化染色。1．4．2移植瘤內(nèi)VEGF、MVD的表達(dá)采用免疫組化SP法檢測，方法步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行（皆1∶100稀釋為工作液），用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。VEGF的判定標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤細(xì)胞漿及胞膜呈棕黃色為陽性細(xì)胞，LuzexF圖像分析系統(tǒng)測定腫瘤組織中VEGF平均灰度值(其灰度值越低，則VEGF表達(dá)水平越高，反之亦然
7、)，將每張切片在40倍鏡下隨機(jī)測10個視野，用平均灰度值評價染色強(qiáng)度。MVD判斷標(biāo)準(zhǔn)參考WEidner等[3]方法。結(jié)果以±s表示。1．5統(tǒng)計處理根據(jù)數(shù)據(jù)類型分別使用組間t檢驗，χ2檢驗和相關(guān)分析，用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。2結(jié)果2.1移植瘤的肺轉(zhuǎn)移情況各組小鼠移植瘤的肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率、肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)、肺濕重等情況,見表1。表1各組小鼠移植瘤的肺轉(zhuǎn)移情況3討論已發(fā)生轉(zhuǎn)移的中、晚期肺癌療效差。腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的一大難題。本文用有血管抑制作用的蘇拉明聯(lián)合槲皮素對肺腺癌的轉(zhuǎn)移進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，聯(lián)合
8、組肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)比其他組明顯減少，有差異顯著性(P<0.05)，說明蘇拉明和槲皮素聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同抑制轉(zhuǎn)移作用。槲皮素組、DDP組及對照組小鼠均發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，差異無顯著性（P＞0.05）；蘇拉明組6/8小鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，低于對照組，而聯(lián)合組5/8小鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移與對照組比差異有顯著性(P<0.05)，進(jìn)一步顯示聯(lián)合用藥協(xié)同作用。本實驗蘇拉明組及槲皮素組與對照組轉(zhuǎn)移率相比無顯著性差異，可能是本研究樣本偏少，擴(kuò)
