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1、乙醇對小鼠原代培養(yǎng)肝細胞損傷及黃芩莖葉總黃酮保護作用的實驗研究論文李素婷，楊鶴梅，周曉慧【關(guān)鍵詞】乙醇；,,肝細胞；,,原代培養(yǎng)；,,黃芩莖葉總黃酮；,,保護作用摘要：目的研究黃芩莖葉總黃酮（SSTF）對乙醇損傷小鼠原代培養(yǎng)肝細胞的保護作用。方法采用胰蛋白酶消化、分離小鼠肝細胞進行原代培養(yǎng)，乙醇體外誘導肝細胞損傷，以不同濃度的SSTF對肝細胞保護，檢測培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性和肝細胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量，MTT法測肝細胞存活率。結(jié)果SSTF（100，200.freelgL-1）明顯改善肝細胞存活率，抑制乙醇引起的ALT活性的升高，對肝細胞中
2、MDA含量的升高有明顯的抑制作用。結(jié)論SSTF對乙醇損傷的小鼠肝細胞有明顯的保護作用，其機制可能與SSTF的抗氧化作用有關(guān)。關(guān)鍵詞：乙醇；肝細胞；原代培養(yǎng)；黃芩莖葉總黃酮；保護作用TheProtectiveEffectofTotalFlavonoidinscutellariabaicalensisStem-LeafonPrimaryCulturedMiceHepatocytesInjuredbyEthanolAbstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectoftotalflavonoidinScutellariaba
3、icalensisstem-leaf(SSTF)onprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.MethodsPrimaryhepatocytesaryculturedhepatocytesfor12h.Thecontentofmalondialdehyde(MDA)inhepatocytesandtheactivityofALTinculturalsupernatantinedbygeneralmethods,theviabilitiesofhepatocyteseasuredbyMTT.ResultsTheelevati
4、onofMDAcontentofhepatocytesandALTlevelinsupermatantofculturalhepatocyesarkablybySSTF,hepatocytesviabilityprovedsignificantlybySSTF.ConclusionSSTFhasaprotectiveactiononprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.Thismightbeassociatedarycultured;SSTF;Protectiveeffect肝臟是酒精代謝的主要臟器，過量飲酒可造成肝臟
5、不同程度的損害，并進一步發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化和肝硬化，嚴重危害人類健康。了解酒精性肝損傷的發(fā)病機制，篩選有效預防和治療的藥物應用于臨床，是當前面臨的重要課題。黃芩莖葉總黃酮(SSTF)是我院中藥所對黃芩的莖葉部分提取的有效成分，整體實驗已證實其對肝損傷有保護作用［1］。本文建立體外乙醇性肝細胞損傷模型，在細胞水平上進一步研究乙醇性肝損傷的機制及SSTF對肝細胞保護作用機制。1材料與方法1.1藥品與試劑SSTF（含總黃酮73%）：承德醫(yī)學院中藥研究所提供，臨用前以蒸餾水配制，用飽和碳酸氫鈉調(diào)pH=7.6；Hanks液高壓滅菌,4℃保存；0.8gL-1胰蛋白
6、酶：用Hanks液溶解，過濾除菌，調(diào)pH7.2，分裝,.freell溶解,5.6%NaHCO3調(diào)pH至7.2，定溶到1000ml,過濾除菌，臨用前每80ml,加入新生小牛血清20ml,青霉素100uml-1,鏈霉素100μgml-1,胰島素5μgml-1；MTT：SIGMA公司；ALT，MDA測定試劑盒:南京建成生物工程研究所。1.2動物昆明種小鼠，1~3d齡乳鼠，雌雄不限，清潔級，承德醫(yī)學院實驗動物管理中心提供。1.3儀器CO2培養(yǎng)箱（TaibaiLNA-122D日本），MD-100半自動生化分析儀（美國Bayer公司），721DA含量,MTT法測定肝細
7、胞存活率。1.6SSTF對誘導肝細胞損傷的作用取上述培養(yǎng)24h肝細胞，設(shè)乙醇損傷模型組、SSTF(100，200，300mgL-1)3個劑量保護組、正常對照組，每組設(shè)8個復孔。模型組和SSTF組加入乙醇100mmolL-1，同時SSTF組加入不同濃度的SSTF，正常對照組加不含血清的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)12h，收集培養(yǎng)上清液檢測ALT活性和MDA含量，MTT法測定肝細胞的存活率。1.7統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以±s表示，用SPSS11.5計算機軟件進行統(tǒng)計學分析,組間比較采用t檢驗，P0.05，有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1乙醇對原代培養(yǎng)肝細胞的損傷不同濃度的乙醇作用于肝細
8、胞，對細胞有劑量依賴性的損傷作用，25mmolL-1作用不明顯，光
