乙醇對(duì)小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷及黃芩莖葉總黃酮保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

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1、乙醇對(duì)小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷及黃芩莖葉總黃酮保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究作者：李素婷，楊鶴梅，周曉慧【關(guān)鍵詞】乙醇；,,肝細(xì)胞；,,原代培養(yǎng)；,,黃芩莖葉總黃酮；,,保護(hù)作用　　摘要：目的研究黃芩莖葉總黃酮（SSTF）對(duì)乙醇損傷小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。方法采用胰蛋白酶消化、分離小鼠肝細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，乙醇體外誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，以不同濃度的SSTF對(duì)肝細(xì)胞保護(hù)，檢測(cè)培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性和肝細(xì)胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量，MTT法測(cè)肝細(xì)胞存活率。結(jié)果SSTF（100，200，300mg・

2、;L-1）明顯改善肝細(xì)胞存活率，抑制乙醇引起的ALT活性的升高，對(duì)肝細(xì)胞中MDA含量的升高有明顯的抑制作用。結(jié)論SSTF對(duì)乙醇損傷的小鼠肝細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與SSTF的抗氧化作用有關(guān)?！　￡P(guān)鍵詞：乙醇；肝細(xì)胞；原代培養(yǎng)；黃芩莖葉總黃酮；保護(hù)作用　　TheProtectiveEffectofTotalFlavonoidinscutellariabaicalensisStem-LeafonPrimaryCulturedMiceHepatocytesInjuredbyEthanol　　Abstr

3、act：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectoftotalflavonoidinScutellariabaicalensisstem-leaf(SSTF)onprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.MethodsPrimaryhepatocytesaryculturedhepatocytesfor12h.Thecontentofmalondialdehyde(MDA)inhepatocytesandtheactivityofALTin

4、culturalsupernatantinedbygeneralmethods,theviabilitiesofhepatocyteseasuredbyMTT.ResultsTheelevationofMDAcontentofhepatocytesandALTlevelinsupermatantofculturalhepatocyesarkablybySSTF,hepatocytesviabilityprovedsignificantlybySSTF.ConclusionSSTFhasaprotecti

5、veactiononprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.Thismightbeassociatedarycultured;SSTF;Protectiveeffect　　肝臟是酒精代謝的主要臟器，過(guò)量飲酒可造成肝臟不同程度的損害，并進(jìn)一步發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化和肝硬化，嚴(yán)重危害人類健康。了解酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制，篩選有效預(yù)防和治療的藥物應(yīng)用于臨床，是當(dāng)前面臨的重要課題。黃芩莖葉總黃酮(SSTF)是我院中藥所對(duì)黃芩的莖葉部分提取的有效成分，整體實(shí)驗(yàn)已證實(shí)其對(duì)肝損傷有

6、保護(hù)作用［1］。本文建立體外乙醇性肝細(xì)胞損傷模型，在細(xì)胞水平上進(jìn)一步研究乙醇性肝損傷的機(jī)制及SSTF對(duì)肝細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1藥品與試劑SSTF（含總黃酮73%）：承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所提供，臨用前以蒸餾水配制，用飽和碳酸氫鈉調(diào)pH=7.6；Hanks液高壓滅菌,4℃保存；0.8g・L-1胰蛋白酶：用Hanks液溶解，過(guò)濾除菌，調(diào)pH7.2，分裝,-30℃保存；基礎(chǔ)培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)基10.0g,用超凈水900ml溶解,5.6%NaHCO3調(diào)pH至7.2，定溶

7、到1000ml,過(guò)濾除菌，臨用前每80ml,加入新生小牛血清20ml,青霉素100u・ml-1,鏈霉素100μg・ml-1,胰島素5μg・ml-1；MTT：SIGMA公司；ALT，MDA測(cè)定試劑盒:南京建成生物工程研究所?！　?.2動(dòng)物昆明種小鼠，1~3d齡乳鼠，雌雄不限，清潔級(jí)，承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心提供。　　1.3儀器CO2培養(yǎng)箱（TaibaiLNA-122D日本），MD-100半自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)Bayer公司），721DA含量,MTT法測(cè)定肝細(xì)胞存

8、活率?！　?.6SSTF對(duì)誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的作用取上述培養(yǎng)24h肝細(xì)胞，設(shè)乙醇損傷模型組、SSTF(100，200，300mg・L-1)3個(gè)劑量保護(hù)組、正常對(duì)照組，每組設(shè)8個(gè)復(fù)孔。模型組和SSTF組加入乙醇100mmol・L-1，同時(shí)SSTF組加入不同濃度的SSTF，正常對(duì)照組加不含血清的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)12h，收集培養(yǎng)上清液檢測(cè)ALT活性和MDA含量，MTT法測(cè)定肝細(xì)胞的存活率?！　?.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以±s表示