乙醇對小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷及黃芩莖葉總黃酮保護(hù)作用的實驗研究

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1、乙醇對小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷及黃芩莖葉總黃酮保護(hù)作用的實驗研究李素婷，楊鶴梅，周曉慧【關(guān)鍵詞】乙醇；,,肝細(xì)胞；,,原代培養(yǎng)；,,黃芩莖葉總黃酮；,,保護(hù)作用　　摘要：目的研究黃芩莖葉總黃酮（SSTF）對乙醇損傷小鼠原代培養(yǎng)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。方法采用胰蛋白酶消化、分離小鼠肝細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，乙醇體外誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，以不同濃度的SSTF對肝細(xì)胞保護(hù)，檢測培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性和肝細(xì)胞內(nèi)丙二醛（MDA）含量，MTT法測肝細(xì)胞存活率。結(jié)果SSTF（100，200，300mg?L-1）明顯改善肝細(xì)胞存活率，抑制乙醇引起的ALT活性的升高，對肝

2、細(xì)胞中MDA含量的升高有明顯的抑制作用。結(jié)論SSTF對乙醇損傷的小鼠肝細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與SSTF的抗氧化作用有關(guān)?！　￡P(guān)鍵詞：乙醇；肝細(xì)胞；原代培養(yǎng)；黃芩莖葉總黃酮；保護(hù)作用　　TheProtectiveEffectofTotalFlavonoidinscutellariabaicalensisStem-LeafonPrimaryCulturedMiceHepatocytesInjuredbyEthanol　　Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectoftotalflavonoidinS

3、cutellariabaicalensisstem-leaf(SSTF)onprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.MethodsPrimaryhepatocytesaryculturedhepatocytesfor12h.Thecontentofmalondialdehyde(MDA)inhepatocytesandtheactivityofALTinculturalsupernatantinedbygeneralmethods,theviabilitiesofhepatocyteseasuredbyMTT.Re

4、sultsTheelevationofMDAcontentofhepatocytesandALTlevelinsupermatantofculturalhepatocyesarkablybySSTF,hepatocytesviabilityprovedsignificantlybySSTF.ConclusionSSTFhasaprotectiveactiononprimarymicehepatocyesinjuredbyethanol.Thismightbeassociatedarycultured;SSTF;Protectiveeffect　　肝臟

5、是酒精代謝的主要臟器，過量飲酒可造成肝臟不同程度的損害，并進(jìn)一步發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化和肝硬化，嚴(yán)重危害人類健康。了解酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制，篩選有效預(yù)防和治療的藥物應(yīng)用于臨床，是當(dāng)前面臨的重要課題。黃芩莖葉總黃酮(SSTF)是我院中藥所對黃芩的莖葉部分提取的有效成分，整體實驗已證實其對肝損傷有保護(hù)作用〔1〕。本文建立體外乙醇性肝細(xì)胞損傷模型，在細(xì)胞水平上進(jìn)一步研究乙醇性肝損傷的機(jī)制及SSTF對肝細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1藥品與試劑SSTF（含總黃酮73%）：承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所提供，臨用前以蒸餾水配制，用飽和碳酸氫鈉調(diào)pH=7.6

6、；Hanks液高壓滅菌,4℃保存；0.8g?L-1胰蛋白酶：用Hanks液溶解，過濾除菌，調(diào)pH7.2，分裝,-30℃保存；基礎(chǔ)培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)基10.0g,用超凈水900ml溶解,5.6%NaHCO3調(diào)pH至7.2，定溶到1000ml,過濾除菌，臨用前每80ml,加入新生小牛血清20ml,青霉素100u?ml-1,鏈霉素100μg?ml-1,胰島素5μg?ml-1；MTT：SIGMA公司；ALT，MDA測定試劑盒:南京建成生物工程研究所?！　?.2動物昆明種小鼠，1~3d齡乳鼠，雌雄不限，清潔級，承德醫(yī)學(xué)院實驗動物管理中心提供?！　?.

7、3儀器CO2培養(yǎng)箱（TaibaiLNA-122D日本），MD-100半自動生化分析儀（美國Bayer公司），721DA含量,MTT法測定肝細(xì)胞存活率。　　1.6SSTF對誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷的作用取上述培養(yǎng)24h肝細(xì)胞，設(shè)乙醇損傷模型組、SSTF(100，200，300mg?L-1)3個劑量保護(hù)組、正常對照組，每組設(shè)8個復(fù)孔。模型組和SSTF組加入乙醇100mmol?L-1，同時SSTF組加入不同濃度的SSTF，正常對照組加不含血清的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)12h，收集培養(yǎng)上清液檢測ALT活性和MDA含量，MTT法測定肝細(xì)胞的存活率。　　1.7統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)以±s

8、表示，用SPSS11.5計算機(jī)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,組間比較采用t檢驗，P0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。　　2結(jié)果