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1、余甘子提取物對小鼠免疫功能的影響論文崔炳權，何震宇，楊澤民，林元藻【摘要】目的探討余甘子對小鼠免疫功能的影響。方法用不同劑量余甘子提取物給正常小鼠連續(xù)灌胃,檢測血清溶血素含量、腹腔巨噬細胞吞噬功能、遲發(fā)型變態(tài)反應、T淋巴細胞增殖和NK細胞活性。結(jié)果余甘子提取物能增加小鼠血清溶血素含量、明顯增強小鼠巨噬細胞吞噬功能、改善遲發(fā)型變態(tài)反應，促進T淋巴細胞增殖，提高NK細胞活性。結(jié)論余甘子能顯著增強小鼠免疫功能?！娟P鍵詞】余甘子;免疫功能;溶血素;T淋巴細胞;巨噬細胞;NK細胞;遲發(fā)型變態(tài)反應余甘子PhyllanthusemblicaL.又名山油柑、油甘子、余甘果等，為大戟科葉下珠屬植物余甘子的成熟
2、果實，廣泛分布在廣東、福建、臺灣、貴州、湖南、廣西、四川、浙江和云南等省區(qū)。余甘子果入藥.freelblicaL.的成熟果實。余甘子提取物制備：將余甘子晾干，取適量余甘子，常規(guī)水煎2次，過濾后混合并濃縮成1g生藥/ml，4℃保存?zhèn)溆谩?，4二硝基氟苯(DNFB)，二甲基亞砜(DMSO)，上海試劑一廠產(chǎn)品。RPMI-1640，MTT，PHA，Sigma產(chǎn)品。721型分光光度計，CO2培養(yǎng)箱，酶標儀，離心機。1.2動物昆明種清潔級小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量為(20±2)g，由廣州市白云區(qū)穗北實驗動物養(yǎng)殖場提供。2方法2.1余甘子提取物對小鼠體液免疫功能的影響采用溶血素測定法2：小鼠40只,體質(zhì)量(2
3、0±2)g，隨機分為4組，每組10只?？瞻讓φ战M，每天灌胃蒸餾水0.5ml/只;試藥大劑量組、中劑量組、小劑量組，每只每天分別灌胃余甘子提取物45,30,15mg/kg，連續(xù)12d。給藥第2天，每只小鼠腹腔注射5%綿羊紅細胞懸液0.2ml免疫，末次給藥后禁食24h，斷頭取血并分離血清，將血清用生理鹽水按1∶50稀釋，取血清1ml，加5%綿羊紅細胞懸液0.5ml和補體1ml，37℃水浴10min，冰浴，離心,取上清液1ml，測定A540，計算樣品的半數(shù)溶血值(HC50)。用HC50代表血清溶血素水平。2.2余甘子提取物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響3小鼠40只，分組及給藥天數(shù)和劑量同實驗“2
4、.1”項。第12天小鼠稱重，后腹腔注射5%淀粉肉湯1ml，致敏24h后，腹腔注射1ml5%雞紅細胞懸液，4h后脫臼處死，腹腔注入5ml冷Hanks液，按摩腹部5min后，解剖，無菌吸取腹腔液涂片，晾干，甲醇固定5min，瑞-姬氏復合染色劑染色，鏡檢，在油鏡下觀察，隨機計數(shù)100個吞噬細胞中吞噬雞紅細胞及吞噬的雞紅細胞總數(shù)，并計算巨噬細胞吞噬百分率與吞噬指數(shù)。2.3余甘子提取物對小鼠T淋巴細胞增殖反應的影響T淋巴細胞增殖反應測定(MTT法)4：小鼠40只，分組及給藥天數(shù)和劑量同實驗“2.1”項。12d后脫頸處死，無菌取脾，制細胞懸液(5×106/ml)，加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl，再加入
5、含PHA(10μg/ml)的RPMI-1640培養(yǎng)液100μl，每個樣品設3個復孔，37℃CO2培養(yǎng)箱中孵育27h，后每孔加入MTT(5mg/μl)10μl，振蕩1min，放入37℃CO2培養(yǎng)箱反應3h，取出離心，棄上清，每孔加DMSO200μl，混勻，振蕩5min，酶標儀測A500。結(jié)果以3個復孔的±s表示。2.4余甘子提取物對特異性細胞免疫功能的影響DNFB誘導小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的測定2，5：小鼠40只，分組及給藥天數(shù)和劑量同實驗“2.1”項。給藥后第6天進行致敏，在小鼠后肢皮下注射0.02ml1%DNFB，給藥第10天同法第2次致敏，于第1次致敏的第9天，用1%DNFB0.02ml涂于
6、右耳進行攻擊，左耳涂布生理鹽水作為對照。次日處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm的打孔器分別在左、右耳同一部位打下耳片，稱重。以耳腫脹度(EPR左右耳片重量之差)作為遲發(fā)型變態(tài)反應的指標。2.5余甘子提取物對非特異性細胞免疫功能的影響NK細胞活性測定2：小鼠40只，分組及給藥天數(shù)和劑量同實驗“2.1”項。12d后，處死取脾，制成細胞懸液，按乳酸脫氫酶(LDH)法，酶標儀測A490值。2.6數(shù)據(jù)處理實驗結(jié)果以±s表示，用spss11軟件進行統(tǒng)計分析比較，采用單因素方差分析檢驗其顯著性。3結(jié)果3.1余甘子提取物對小鼠體液免疫功能和腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響結(jié)果見表1。與對照組相比，灌胃給藥組都
7、能顯著提高血清血溶素水平(P0.05)，但組間比較無顯著差異(P0.05)，無顯著量-效關系。與對照組比較，灌胃給藥組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)有顯著性差異(P0.05)，提示余甘子提取物能提高小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬功能;巨噬細胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率均隨劑量增加而增加，但劑量增加到一定程度后，其作用效果就不再增加(中劑量組和大劑量組之間的吞噬百分率和吞噬指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義，P0.05)。表1余甘子提取物對小鼠體
