燈盞花素對大鼠腦缺血再灌注后腦內(nèi)fas表達(dá)的抑制作用論文

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1、燈盞花素對大鼠腦缺血再灌注后腦內(nèi)Fas表達(dá)的抑制作用論文【摘要】目的研究燈盞花素對大鼠腦缺血再灌注引起腦損傷的保護(hù)作用，探討其作用機(jī)制。方法選用40只雄性gSO4治療組、燈盞花素治療組Ⅰ和Ⅱ（BreⅠ、Ⅱ組）。結(jié)扎中腦動脈，然后再灌注。用TUNEL法和免疫組化法分別檢測腦組織凋亡細(xì)胞和Fas陽性細(xì)胞的變化。結(jié)果①降低腦組織凋亡細(xì)胞：MgSO4組、BreⅠ、Ⅱ組在腦缺血再灌注23h后海馬區(qū)凋亡神經(jīng)元/海馬神經(jīng)元均較IR組海馬區(qū)凋亡神經(jīng)元/海馬神經(jīng)元低，差異有顯著性。②降低Fas陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量：MgSO4組、BreⅠ組和BreⅡ組在腦缺血再灌注23h后海馬區(qū)Fas表達(dá)陽性神經(jīng)元/海馬神

2、經(jīng)元均較IR組海馬區(qū)Fas表達(dá)陽性神經(jīng)元/海馬神經(jīng)元低，差異有顯著性。結(jié)論燈盞花素可顯著保護(hù)大腦缺血再灌注引起的腦損傷,可能與其抑制Fas蛋白的表達(dá)有關(guān)。其作用優(yōu)于單用MgSO4?！娟P(guān)鍵詞】燈盞花素；腦缺血；再灌注；凋亡細(xì)胞；Fas蛋白Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectandmechanismofbreviscapineonratcerebraldamageafterischemiareperfusion.Methods40malegSO4treatmentgroup,breviscapinetreatmentgroupⅠand

3、Ⅱ.Thebrainarteryethodandimmunohistochemicalmethodrespectively.Results①Apoptosisofneuronscellsinbrainpusapoptosisneurons/hippocampalneurons23hrsafterischemiareperfusion,andBregroupberofFaspositivecellsincerebralpusFaspositiveneurons/hippocampalneurons23hrsafterischemiareperfusion,andBregroupis

4、chemiareperfusionbraininjury,.freelightberelatedtoinhibitionofFasproteinexpression.Itseffectia;reperfusion;apoptosiscells;Fasprotein腦血管缺血性疾病是高致殘率和高死亡率的疾病，神經(jīng)保護(hù)藥物將有助于減輕缺血半暗區(qū)的損傷，促進(jìn)腦功能的恢復(fù)。燈盞花素(breviscapine.freeliareperfusion，IR)有保護(hù)作用［4,5］，然而，其治療機(jī)制尚不完全清楚。本文進(jìn)一步研究燈盞花素(Bre)對大鼠腦缺血再灌注引起腦損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制，觀察

5、其保護(hù)作用是否比MgSO4更有效。1材料與方法1.1材料40只gSO4(無錫第七制藥廠)，用母液治療，傳統(tǒng)常用藥物；HistostainTMSPKits和抗Fas蛋白抗體為美國SantaCruz生物技術(shù)產(chǎn)品。1.2方法1.2.1動物分組40只gSO4組（30mg/kg）。所有藥物在缺血10min后靜脈給藥。實(shí)驗(yàn)過程中無死亡和脫失。1.2.2中腦動脈結(jié)扎(MCAO)方法見文獻(xiàn)［6］。1.2.3原位末端標(biāo)記（TUNEL）染色用TUNEL方法檢測凋亡細(xì)胞的DNA片段。在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞,觀察缺血再灌注2h，5h,23h腦組織凋亡細(xì)胞的變化。1.2.4免疫化學(xué)染色免疫組織化學(xué)抗Fas

6、蛋白染色及Fas蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)的觀察與半定量測定?？焖偃∫徊糠秩毖竽X海馬組織，常規(guī)經(jīng)甲醛固定、脫水、包埋、切片(5μm)，免疫組織化學(xué)染色采用鏈霉素親生物素－過氧化物酶法(SP法)。經(jīng)梯度脫蠟、抗原修復(fù)(胰酶消化)、漂洗、小牛血清封閉非特異抗原、加一抗、漂洗、加二抗、漂洗、3，3’二氨基聯(lián)苯胺染色，蘇木素染色、脫水、透明、封片等步驟，在光鏡下觀察，并進(jìn)行半定量圖像分析。20倍物鏡下在每張切片梗死灶周邊區(qū)域即缺血半暗帶區(qū)取相互不重疊的6個(gè)視野，記取其中Fas蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞，每只大鼠所有切片上陽性細(xì)胞密度(以陽性細(xì)胞數(shù)/10×20視野表示)的（±s）作為該只動物缺血半暗帶區(qū)陽性細(xì)

7、胞密度代表值，并顯微照相。1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，用StudentNeanKeul檢驗(yàn)后再進(jìn)行方差分析，以P0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1Bre對神經(jīng)元凋亡的影響在缺血再灌注后3個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)，與IR組比較，Bre組和MgSO4組大鼠海馬的平均凋亡細(xì)胞明顯降低。Bre組大鼠海馬平均凋亡細(xì)胞比IR組和MgSO4組顯著地減少，差異有顯著性。見表1。表1腦缺