野百合堿處理大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的塑造

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1、野百合堿處理大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的塑造肺動(dòng)脈高壓尤其是特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(IdiopathicPulmonaryArteryHypertension,IPAH)是一種預(yù)后極差的疾病,其發(fā)病機(jī)制不明,治療棘手。野百合堿（Monocrotatine,MCT）屬于豆科植物野百合屬，它所引起的肺動(dòng)脈高壓(PulmonaryArteryHypertension,PAH)大鼠是一種較為理想的肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型［１，２］，在MCT-PAH動(dòng)物模型大鼠血清中已發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮素-1（ET-1）、心鈉素（ANP）及血栓素2（TXB2）明顯升高，而環(huán)鳥(niǎo)苷酸（CGMP）、降鈣

2、素基因相關(guān)肽(CGRP)及6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1a)明顯下降［３］。但不清楚這些炎癥介質(zhì)的改變是PAH發(fā)病的起始原因，抑或是PAH的結(jié)果。作者觀察MCT所致PAH大鼠血清對(duì)肺動(dòng)脈壓力、肺血管重塑的影響，以了解炎癥機(jī)制在PAH發(fā)病過(guò)程中的作用?！　?材料與方法　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與MCT溶液配制　　雄性CT結(jié)晶(美國(guó)產(chǎn))溶解在0.5N鹽酸(HCL)溶液，用0.5N碳酸氫鈉(NaHCO3)調(diào)整pH為7.4的溶液。　　1.2MCT肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型建立　　MCT注射大鼠（單劑腹腔注射60mg/kg-1）20只為MCT-PAH動(dòng)物模型

3、組（MCT組），以相同劑量等張生理鹽水以相同方法注射正常大鼠10只為對(duì)照組（IS組）；兩組大鼠正常飼養(yǎng)，每隔7d取各組大鼠1只處死，行大體病理觀察，且取血標(biāo)本及肺組織保存；對(duì)照組在第28天（IS28），試驗(yàn)組在第28天（MCT28）、第42天（MCT42）各取大鼠5只行右心導(dǎo)管檢查及肺動(dòng)脈病理觀察?！　?.3對(duì)照組用大鼠血漿（DB）和試驗(yàn)組用大鼠血清（SB）制備?！　B制備：取成年雄性CT60mg/kg-1。飼養(yǎng)至14d，分別取20只大鼠尾靜脈血20ml。取得肝素抗凝大鼠血后，立刻以1500～2000r/min離心15～20min后取上清液

4、，儲(chǔ)藏-70℃冰柜保存。　　1.4實(shí)驗(yàn)與分組　　將實(shí)驗(yàn)大鼠分為對(duì)照組（D組）35只，試驗(yàn)組（S組）35只。S組從大鼠陰莖靜脈注入SB的血漿液，D組用同樣劑量同樣方法注入DB的血漿液。兩組大鼠分別做好標(biāo)志，飼養(yǎng)到第7天后每隔2～4d每組處死大鼠1只,做大體病理觀察,第17、22、53、60天，每組取5只大鼠進(jìn)行肺動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定后，處死實(shí)驗(yàn)大鼠，取雙側(cè)肺組織，10%甲醛液固定保存?！　　　?.5觀察指標(biāo)　　右心導(dǎo)管檢查：將烏拉坦（北京產(chǎn)）配制成12%濃度，稱取大鼠體重，以1.0ml/kg腹腔內(nèi)注射,麻醉后分離右側(cè)頸內(nèi)靜脈,置入微導(dǎo)管(北京協(xié)和

5、醫(yī)院提供),連接Gould（美國(guó)產(chǎn)）心電監(jiān)護(hù)儀,緩慢推送導(dǎo)管至右心房、右心室、肺動(dòng)脈，出現(xiàn)典型穩(wěn)定的壓力曲線波時(shí)，記錄右心室壓（RVP）、肺動(dòng)脈收縮壓（PAP）及壓力曲線。紙速為5mm/s，計(jì)算平均肺動(dòng)脈壓（mPAP）。肺動(dòng)脈病理標(biāo)本制作：切開(kāi)大鼠左側(cè)胸腔，取左側(cè)肺組織,切除其上附著的縱隔組織后置入10%甲醛液固定，肺門(mén)橫斷取材、石蠟包埋，制片，HE染色?！　?.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　　各項(xiàng)數(shù)據(jù)以(x±s)表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析及q檢驗(yàn)。　　2結(jié)果MCT處理大鼠肺動(dòng)脈壓力（表1）及病理改變。對(duì)照組大鼠在整個(gè)試驗(yàn)期全部生存

6、（10只），而MCT處理大鼠試驗(yàn)過(guò)程死亡4只。大體病理：對(duì)照組大鼠肺組織呈淡紅色，未見(jiàn)出血點(diǎn)、瘀點(diǎn)、瘀斑；單劑注射MCT大鼠在MCT7、14、21、28、35、42天肺組織表現(xiàn)變蒼白，均見(jiàn)不同程度的瘀點(diǎn)瘀斑，隨時(shí)間延長(zhǎng)更趨明顯。試驗(yàn)組SB7、9肺表面基本正常，SB12、14、17、19、21、23、27兩側(cè)肺表面變白均可見(jiàn)點(diǎn)狀出血灶、瘀斑，右肺中、后葉明顯。光鏡檢查：觀察對(duì)照組肺動(dòng)脈血管，內(nèi)皮細(xì)胞扁平連續(xù)，細(xì)胞分布均勻，大小厚薄較一致。試驗(yàn)組肺動(dòng)脈內(nèi)膜增生，中層增厚（圖1、2），并隨時(shí)間的延長(zhǎng)日趨嚴(yán)重（圖3、4），SB60動(dòng)脈中膜厚度比例已達(dá)

7、正常對(duì)照組的兩倍之多（圖5）。電鏡檢查：對(duì)照組正常肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞扁平緊緊地粘附在基底膜上，細(xì)胞的游離面出現(xiàn)微紱毛突起。試驗(yàn)組SB17肺動(dòng)脈壁增厚，平滑肌增生，平滑肌細(xì)胞核固縮（圖6）；SB22平滑肌細(xì)胞增寬，膠原纖維增生（圖7）；SB53內(nèi)皮細(xì)胞基底部變窄，向血管腔內(nèi)突出，部分核固縮，空泡拱橋樣改變（圖8）；SB60彈力板粗不勻，內(nèi)皮細(xì)胞空泡形成，血管壁增厚（圖9）。兩組肺動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。表1MCT處理大鼠肺血流動(dòng)力學(xué)與右心肥大指數(shù)的變化(略)表2試驗(yàn)組與對(duì)照組肺動(dòng)脈平均壓與右室壓的比較（略）　　3討論　　MCT被肝臟激活為親電

8、子的MCT，引起肺血管內(nèi)皮損傷及后續(xù)的肺血管重塑［４］。MCT可重復(fù)誘導(dǎo)嚴(yán)重的進(jìn)展性肺動(dòng)脈高壓在本研究中被證實(shí)，肺動(dòng)脈壓力幾乎增加了3倍，同時(shí)觀察到右室肥厚和大鼠體