雷公藤甲素對大鼠左肺切除加野百合堿誘導肺動脈高壓模型的影響

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1、●四川大學臨床醫(yī)學碩士專業(yè)學位論文曹錄肺動脈高壓可由多種因素引起，在兒童最常見于左向右分流先天性心臟病。對先天性心臟病肺動脈高壓的預防和治療一直是小兒心血管領域研究的熱點。近年研究證明，不同病因的PH具有相似的肺血管重構病理學特征【11。肺血管重構主要包括：1)細胞增殖：平滑肌細胞(VSMC)／成纖維細胞的轉型、增殖和遷移，嚴重者出現(xiàn)新生內(nèi)膜形成：2)基質(zhì)重構：基質(zhì)崩解更新，構成改變和沉著增加[2J。目前研究PH最常用的動物模型有慢性缺氧、野百合堿(MCT)、單純肺切除和腹主動脈與腔靜脈分流動物模型，但均不能形成嚴重PH最具特征性的病理學改變?nèi)鐓矤畈∽?/p>

2、與新生內(nèi)膜的形成。有研究報道血流動力學改變加MCT共同作用可以誘導產(chǎn)生有新生內(nèi)膜形成的PH模型，注射MCT后在鎖骨下動詠與肺動脈吻合后則形成了新生內(nèi)膜，但該模型肺血流量和壓力均與正常狀態(tài)有差斟31。左肺切除加野百合堿注射所誘導的肺動脈高壓模型組能較好地模擬大量左向右分流的肺血流量劇增所至肺血管重構的病理生理改變，適宜于運用于進行肺動脈重構藥物干預的研究。雷公藤是傳統(tǒng)中藥材衛(wèi)矛科雷公藤屬木質(zhì)藤本植物，具有抗炎、抗增殖和抑制腫瘤轉移等廣泛的藥理效用，已經(jīng)用于治療類風濕性關節(jié)炎、紅斑狼瘡、皮膚病、腎臟疾病和腫瘤等50多個病種，雷公藤提取物中活性最高的是高氧化

3、二萜類化合物——雷公藤甲素(Triptolide)，國外近年有學者采用雷公藤甲素干預大鼠肺動脈高壓模型取得成功【41，該試驗還被用來研究肺提取的mRNA的不同時間點的變化，可探討其作用機制拓開了新的思路。本研究旨在建立一種新的PH模型——大鼠左肺切除加野百合堿腹腔注射所致PH動物模型，模擬左向右分流型先心病的病理生理，且通過對照試驗，觀察雷公藤甲素在該PH模型中的作用，為今后臨床使用雷公藤甲素延緩或治療PH提供新的實驗依據(jù)。6●四川大學臨廉醫(yī)學碩十專業(yè)學位論文材料和方法一、動物分組與材料：1．雄性SD大鼠(350．_400克)60只(由四川大學華西公共

4、衛(wèi)生實驗動物中心提供)，隨機分為6組：I組(正常對照組)；II組(空白對照組)；HIa組(連續(xù)治療組)；mb組(HIa組的安慰劑對照組)；Wa組(延遲治療組)；IVb組(Wa組的安慰劑對照組)。每組各lO只動物，各組平均體重差別無統(tǒng)計學意義。2．主要試劑和儀器：試劑：雷公藤甲素(福建醫(yī)學科學研究所提供)純度為99．9％(溶劑：2％丙二醇)，野百合堿MCT(購于Sigma公司)，小鼠抗大鼠a一平滑肌肌動蛋白(a。actin)單克隆抗體，PCNA小鼠抗大鼠單克隆抗體(武漢博士德)，MMP2和MMP9小鼠抗大鼠多克隆抗體(武漢博士德)，caspase-3兔抗

5、鼠單克隆抗體(瑞士Roche公司)，引物(上海生物工程有限公司)，Trizol(瑞士Roche公司)，RevertAid“FirstStrandcDNASynthesisKit(立陶宛MBI公司)，TaqDNA聚合酶(北京博大)，dNTP(莢國Promega公司)，Marker(北京天為時代)，SYBRGreenI(瑞士Roche公司)。儀器：HX-200型動物呼吸機(成都泰盟科技有限公司)，PM-8000型嬰兒有刨心電監(jiān)護儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)，Nikon&Spot圖像采集處理系統(tǒng)(美國)，F(xiàn)TC2000實時熒光定量基因擴增儀(加拿大

6、楓嶺公司)。二、動物模型的建立：1．肺切除手術：大鼠于后肢肌注阿托n晶(22．5．g／kg)后30min腹腔注射10％水合氯醛(0．04ml／kg)，麻醉后用直徑2mm的塑料導管在直視下進行氣管插管，用HX200型動物呼吸機維持通氣(潮氣量3ml，吸呼比1：2，呼吸頻率607◆●■朋川大學臨陜醫(yī)學碩士專業(yè)學位論丈次／min)。左側胸壁備皮后用碘伏消毒，鋪巾后沿左側第5肋『日J隙切開胸壁和胸膜腔，結扎肺動脈、靜脈和支氣管后切除左肺，用少量生理鹽水沖洗殘端，逐層關閉胸壁，待動物對刺激有反應后拔管。所有動物術后吸氧24小時(2L／rain／籠)，以后則常氧直

7、到處死。(華西婦產(chǎn)兒科實驗室)2．野百合堿注射：MCT的配制及用量參照文獻‘51報道的方法進行。除正常組外各組于肺切除術后1周于項背部皮下注射MCT60mg／kg，動物均自由飲水和攝食。三、藥物干預：(華西公共衛(wèi)生動物飼養(yǎng)中心)I組(正常對照組)：未行任何處理常規(guī)飼養(yǎng)35天。Ⅱ組(空白對照組)：行左肺切除加野百合堿不行任何藥物治療。IIIa組(連續(xù)治療組)：大鼠從肺切除術后第5天到第35天用雷公藤甲素0．25mg／kg腹膜內(nèi)注射，隔天一次；IIlb組(IIIa組的安慰劑對照組)：大鼠從肺切除術后第5天到第35天用等量溶劑(2％丙二醇，5ml／kg)16

8、1腹膜內(nèi)注射，隔天一次。Wa組(延遲治療組)：大鼠從肺切除術后第2l到第35天用雷公藤甲素O．