高效液相色譜法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇的含量論文

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1、高效液相色譜法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇的含量論文鄧鵬謝一輝張葉青余無(wú)雙【摘要】目的建立安痛藤中羽扇豆醇含量的測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜（HPLC）法，色譜柱為diamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，流動(dòng)相為甲醇∶水=98∶2,流速1.0ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)206nm，柱溫為30℃。結(jié)果羽扇豆醇在0.316～3.16μg范圍內(nèi)與峰面積有良好線性關(guān)系,r=0.9995，平均回收率為97.82%，RSD為2.49%。結(jié)論該方法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇含量快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜安痛藤羽扇豆醇安痛藤為葡萄科白粉藤屬植物苦朗藤Cis

2、susassamica(LaonsilC18(5μm，250mm×4.6mm;DIKMA公司)；KQ3200型超聲儀；羽扇豆醇對(duì)照品(自制,歸一化含量99.80%)；甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水；安痛藤藥材采于江西贛南地區(qū)，由江西中醫(yī)學(xué)院劉慶華老師鑒定為葡萄科白粉藤屬植物苦朗藤Cissusassamica(LaonsilC18(5μm,250mm×4.5mm)色譜柱,甲醇∶水(98∶2)為流動(dòng)相,柱溫30℃,流速1ml·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)206nm；羽扇豆醇對(duì)照品進(jìn)樣量和安痛藤供試液進(jìn)樣量20μl。在上述色譜條件下,羽扇豆醇與其它成分分離良好,理論

3、塔板數(shù)以羽扇豆醇峰計(jì)算不低于5000；分離度接近于1.5,基本實(shí)現(xiàn)基線分離。結(jié)果見圖1～2。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取羽扇豆醇對(duì)照品適量，置于25ml量瓶中,.freelg/ml）。2.3供試品溶液的制備取安痛藤粉末(過(guò)60目)約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇40ml，稱定重量，超聲30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液20ml，水浴蒸干，用氯仿溶解(2，2，1ml)，合并氯仿液上1.5g硅膠柱，用氯仿洗脫，收集洗脫液8ml，蒸干，用甲醇溶解并定容至2ml，0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。圖1羽扇豆醇對(duì)照

4、品色譜圖（略）圖2安痛藤供試液色譜圖（略）2.4線性關(guān)系的考察精密吸取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8，10ml置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，制成濃度為15.8，31.6，63.2，94.8，126.4，158μg·ml-1羽扇豆醇對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20μl。以羽扇豆醇的質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=383.54X+26.066，r=0.9995。結(jié)果表明，羽扇豆醇在0.316～3.16μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取安痛藤約2g，精密稱定，按供試液制備項(xiàng)制備供試液，進(jìn)樣20μl/次，共6次，分別在0，4，8

5、，12，16，24h進(jìn)樣并記錄峰面積值。計(jì)算結(jié)果顯示：6次羽扇豆醇含量測(cè)定結(jié)果基本不變，平均值為0.0162%，RSD=1.20%，表明供試液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取安痛藤供試液，連續(xù)進(jìn)樣6次，20μl/次，6次進(jìn)樣測(cè)得羽扇豆醇含量平均結(jié)果為0.0163%,RSD=1.33%，表明本實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取安痛藤粉末6份，每份約2g，精密稱定，按供試液制備項(xiàng)制備供試液，進(jìn)樣20μl，記錄峰面積值。6份樣品羽扇豆醇含量平均值為0.0160%，RSD=2.41%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。2.8加樣回收實(shí)驗(yàn)取安痛藤粉末(過(guò)60目)6

6、份，每份約2g，精密稱定，按供試液制備項(xiàng)制備，在“精密吸取續(xù)濾液20ml”后分別精密加入羽扇豆醇對(duì)照品溶液1ml（含羽扇豆醇為0.1223mg），繼續(xù)制得供試液。進(jìn)樣20μl/次，每份供試品溶液進(jìn)樣3次。結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，用HPLC法測(cè)定安痛藤中羽扇豆醇的含量，回收率結(jié)果令人滿意。2.9系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)選擇了3種色譜柱：DiamonsilC18(5μm，250mm×4.6mm)，HypersilODS2(5μm，250mm×4.6mm,大連依利特)色譜柱和EclipseXDB-C18(5μm，250mm×4.6mm，安捷倫公司)色譜柱，按本法測(cè)定安痛藤藥材中羽扇豆

7、醇的含量，測(cè)定結(jié)果基本一致，均值為0.0162%,RSD為2.49%。表明本法適應(yīng)性較好。表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）2.10樣品的含量測(cè)定取不同采收期的安痛藤樣品按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，進(jìn)樣量20μl，測(cè)定供試品中羽扇豆醇的含量。結(jié)果見表2。表2安痛藤不同采收期羽扇豆醇的含量測(cè)定（略）結(jié)果顯示，不同采收期安痛藤樣品中的羽扇豆醇含量存在較大的差異。由于樣品來(lái)源于山區(qū)，受到人為因素的影響較小，主要影響因素可能在于日曬與水分等自然條件。2004,2005,2006年采集的樣品中，以20051125采收的羽扇豆醇含量最高。3討論3.1供試品提取方法的選擇羽