高效液相色譜法測定川木通中豆甾醇的含量論文

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1、高效液相色譜法測定川木通中豆甾醇的含量論文魏志奇陳幸李彬董小萍【摘要】目的建立用高效液相色譜（HPLC）法測定川木通中豆甾醇的含量。方法色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-水(97∶3)，檢測波長為210nm，流速1.0ml·min-1，進(jìn)樣量5μl，柱溫30℃。結(jié)果豆甾醇進(jìn)樣量在1.835～18.35μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，r=0.9999.freelatisarmandiiFranch.或繡球藤ClematismontanaBuch.-Ham.的干燥藤莖。川木通具有清熱利尿、通經(jīng)下乳之功效，主治水腫、小便不利與經(jīng)閉乳少

2、等癥，是常用中藥材［1］?！吨袊幍洹芬?guī)定以齊墩果酸作為川木通薄層鑒別的特征性成分。在我們以往的研究中，按《中國藥典》方法實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明9批川木通均不含此成分，但在薄層色譜上顯示出一紫紅色共同斑點(diǎn)［2］。經(jīng)過成分分離、鑒定，從小木通的莖中分離得到4個(gè)化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為9,.freelp、UV、IR、EI-MS、13C-NMR等數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值一致［3］，含量99.8％）；小木通、繡球藤藥材采集自四川省崇州市、重慶南川，四川汶川、彭州、洪雅、天全、都江堰、峨眉和康定等地，由四川省中藥研究所生藥室方清茂副研究員鑒定；甲醇為色譜純，水為二次重蒸水。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱

3、為DiamonsilC18柱（4.6mm×150mm，5μm，迪馬公司）；流動(dòng)相為甲醇-水（97∶3）；檢測波長為210nm；流速1.0ml·min-1；柱溫30℃；進(jìn)樣量5μl；分離度大于1.5。見圖1～2。圖1豆甾醇的HPLC圖（略）圖2川木通樣品的HPLC圖（略）2.2對照品溶液的制備取豆甾醇對照品適量，精密稱定，置1ml量瓶中，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（1.835mg·L-1）。2.3供試品溶液的制備取川木通生藥約2g，精密稱定重量，用20ml氯仿回流提取2次，1h/次，放冷，濾過，合并濾液，蒸干，殘?jiān)眉状?氯仿（1∶1）溶解并稀

4、釋成1ml，搖勻，即得。2.4線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)取對照品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣1，3，5，7，10μl，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），得回歸曲線方程：Y=39476X+26684，r=0.9999。結(jié)果表明豆甾醇進(jìn)樣量在1.835～18.35μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。2.5精密度實(shí)驗(yàn)取同一批號供試品，按“2.3”法制備供試品溶液。按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測得峰面積RSD=0.3%，(n=5)。2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按樣品測定方法，對同一批川木通藥材進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，計(jì)算其平均含量為0.27mg·g-1，RSD=0.6%。2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

5、取同一批號供試品，按“2.3”項(xiàng)下法制備供試品溶液，每2h進(jìn)樣1次，重復(fù)5次，RSD=0.7%，說明供試品在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)稱3份同一批號已知含量的供試品2g，分別加入0.4，0.5，0.6ml濃度為1.944mg·ml-1的對照品溶液配成低，中，高3個(gè)濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測定，平行測定3次，測得平均回收率分別為101.1%，101.0％，103.6％，RSD分別為1.3％，2.1％，0.7％。2.9樣品測定取不同產(chǎn)地供試品各3份，按“2.3”項(xiàng)下法制備供試品溶液。照上述色譜條件分別進(jìn)樣，測定。結(jié)果見表1。表1川木通中豆甾醇的含量測定結(jié)果（略）3討論本實(shí)驗(yàn)分別采

6、用不同比例甲醇-水（95∶5，96∶4，97∶3）為流動(dòng)相實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明以甲醇-水（97∶3）為流動(dòng)相時(shí)豆甾醇的峰形和出峰時(shí)間最佳。此條件下，方法的可靠性高，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，適用于川木通藥材中豆甾醇的含量測定?！?/p>